1樓：八戒產權
「獲取目的基因」是實施基因工程的第一步。目的基因可以從自然界中已有的物種中分離出來，也可以用人工的方法合成。為什麼不能直接從含有目的基因的生物細胞中獲取?
因為生物細胞中所含的目的基因很少，要從浩瀚的「基因海洋」中獲得特定的目的基因，猶如大海撈針，是十分不易的。因此需要構建基因文庫或利用pcr技術擴增。
rt-pcr的原理是什麼？有何用途？
2樓：愛做作業的學生
原理是：提取組織或細胞中的總rna，以其中的mrna作為模板，採用oligo（dt）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cdna。再以cdna為模板進行pcr擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。
該技術主要用於：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cdna探針、構建rna高效轉錄系統。
rt- pcr（reverse transcription-polymerase chain reaction）即逆轉錄pcr，是將rna的反轉錄（rt）和cdna的聚合酶鏈式擴增（pcr）相結合的技術。
首先經反轉錄酶的作用從rna合成 cdna，再以cdna為模板，擴增合成目的片段。rt-pcr技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平，細胞中rna病毒的含量和直接克隆特定基因的cdna序列。
作為模板的rna可以是總rna、mrna或體外轉錄的rna產物。無論使用何種rna，關鍵是確保rna中無rna酶和基因組 dna的汙染。
用於反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、oligo dt 及基因特異性引物中的一種。對於短的不具有髮卡結構的真核細胞mrna，三種都可。
擴充套件資料
反轉錄酶的選擇
1、money 鼠白血病病毒（mmlv）反轉錄酶：有強的聚合酶活性，rna酶h活性相對較弱。最適作用溫度為37℃。
2、禽成髓細胞瘤病毒（amv）反轉錄酶：有強的聚合酶活性和rna酶h活性。最適作用溫度為42℃。
3、thermus thermophilus、thermus flavus等嗜熱微生物的熱穩定性反轉錄酶：在mn存在下，允許高溫反轉錄rna，以消除rna模板的二級結構。
4、mmlv反轉錄酶的rnase h突變體：商品名為superscript 和superscriptⅱ。此種酶較其它酶能多將更大部分的rna轉換成cdna，這一特性允許從含二級結構的、低溫反轉錄很困難的mrna模板合成較長cdna。
3樓：禁封
rt-pcr有兩種解釋：
1，最常用的理解：rt 是『逆轉錄』（reverse transcription）的縮寫
2，現在也有人這麼用：rt是『實時』（real time）的縮寫
1，先說逆轉錄pcr：
這項技術使用的『逆轉錄酶』來自逆轉錄病毒，是一種能按照鹼基互補配對原則，以脫氧核糖核苷酸為底物，以寡居dt為引物，把mrna轉換成相應dna的酶，由於該酶的效果與中心法則（dna所承載的生物資訊表達順序應該是dna-rna-蛋白）順序相反，故而有'逆轉錄'之稱。
由於逆轉錄反應使用了引物和模板，也是聚合酶鏈式擴增的（pcr是『鏈式擴增反應』polymerase chain reaction 的縮寫）故稱為rt-pcr。
再說其用途：
我們提取的rna主要是rrna，即核糖體rna，但很少有人用它做些什麼，倒是含量較少的mrna，即信使rna是中心法則所述的遺傳資訊表現的中轉站，所以我們要把微量的信使rna搞出來，更重要的是，rna太容易分解了，環境中無處不在的rna酶啊，以及其容易被水解的特點啊，讓你不得不盡快把珍貴的信使rna轉化成穩定的形式，於是就有了rt-pcr。
2， 再說實時pcr
細胞瞬時轉錄的mrna種類頗多，各種mrna含量也有實時的改變，這反映了細胞核內轉錄因子根據環境要求在做出相應的變化，realtime-pcr，以及quantitative realtime-pcr （簡稱qrt-pcr）就應運而生。
原理：利用pcr高度的特異性，通過特定的引物能在複雜樣品中得到的特定序列的dna，而這種特定dna的產量跟反應初始階段模板量是直接相關的。簡單說來。
經過一個pcr迴圈，可以把一個模板變成兩個，在經過一個迴圈，就會變成四個，以此類推。如果pcr的檢測線是1000個產物，那麼當你的初始樣品中模板是n個，那就需要經歷的迴圈數為
的時候才能檢測，這就把迴圈數與初始樣品中模板數聯絡起來了。也就是說經過計算，達到檢測限的迴圈數就能反映初始rna樣品中某種rna的含量多少。
在實際中，使用了特殊的含有熒光劑的引物，光學檢測相應光強度的產物所需的迴圈數，能高度靈敏的達到目的。
realtime-pcr有兩種。絕對定量和相對定量。
絕對定量常用於逆轉錄病毒侵染細胞的檢測，比如你想知道有多少hiv侵染了樣本中的t細胞，你可以收集一定數量的t細胞並提取rna，通過逆轉錄，以及taq酶利用hiv的特異引物進行擴增，最終的迴圈數可以反應你的這群t細胞正在被多少個hiv侵染。
相對定量常用於檢測實時的轉錄譜，例如在給藥前後，某重要基因轉錄的實時變化，可以分別收取給藥前後的全rna，用相對轉錄量不變的基因為內參，如gapdh或beta-actin，與目標基因轉錄的轉錄量對比，來定量反應藥物對目的基因轉錄含量的影響。一氣呵成，難免有錯，看著玩吧
4樓：匿名使用者
rt—pcr（reverse transcription-polymerase chain reaction）是將rna的反轉錄（rt）和cdna的聚合酶鏈式擴增（pcr）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用，從rna合成cdna，再以cdna為模板，在dna聚合酶作用下擴增合成目的片段。rt—pcr技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平、細胞中rna病毒的含量和直接克隆特定基因的cdna序列。
作為模板的rna可以是總rna、mrna或體外轉錄的rna產物。無論使用何種rna，關鍵是確保rna中無rna酶和基因組dna的汙染。biog rna保護劑可有效阻止rnase活性來保護rna不被降解；儲存在rna保護劑中的rna樣本在-20℃條件可儲存六個月，並且加入保護劑的rna可直接做下游實驗，無任何影響。
biog super cdna synthesis kit具有超高的靈敏度，最低可檢測到1pg總rna 中的幾十個目標rna分子，反應結果適用於後續的pcr分析、pcr克隆、定量pcr等。
5樓：匿名使用者
pcr全稱多聚酶鏈式反應，原理是dna的體外擴增。
具體來說：在ep管里加入dna、合成原料（dntp、引物）、耐熱的dna聚合酶（taq）後，放入pcr儀，pcr儀會利用升溫使dna變性，在聚合酶的作用下使單鏈複製成雙鏈，進而達到基因複製的目的。
用途：1、核酸的基礎研究：基因組克隆
2、不對稱pcr製備單鏈dna用於dna測序3、反向pcr測定未知dna區域
4、反轉錄pcr（rt-pcr）用於檢測細胞中基因表達水平、rna病毒量以及直接克隆特定基因的cdna
5、熒光定量pcr用於對pcr產物實時監控6、cdna末端快速擴增技術
7、檢測基因的表達
8、醫學應用：檢測細菌、病毒類疾病；診斷遺傳疾病；診斷腫瘤；應用於法醫物證學
6樓：淡藍521慧
rt-pcr較逆轉錄pcr,有叫反轉錄pcr，是聚合酶鏈式反應的一種廣泛應用的變形，在rt-pcr中，一條rna鏈被逆轉錄成為互補dna，在一次為模板通過pcr進行dna擴增。使用過biodai相關的實時熒光定量pcr監測，ct 值的起跳點還是挺早的。在臨床上給藥監測啥的，都是有很好的用處的。
7樓：一零啞劇
熒光定量pcr目的：在pcr反應中，無論是定性還是定量分析，分析的都是pcr的終產物。但是有時候想知道的卻是未經pcr放大之前的起始模板量，rt-pcr應用而生。
pcr技術中為什麼3次迴圈才能得到目的基因
8樓：匿名使用者
原因如下：
1、第一個迴圈擴增出來的新片段很長很長。
2、第二個迴圈以新的長片段為模板進行，但新片段的一端是引物開頭的，所以第二個迴圈得到的片段就是我們需要的長度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因。
3、第三個迴圈，當以第二個迴圈得到的新片段為模板時，因為這個片段的長度就是需要擴增的長度，當第三個迴圈完成時，這個片段是需要的長度，且是雙鏈dna,這就得到了需要的目的基因了。
9樓：蕭峰虛竹與段譽
因為在前兩個迴圈內產生的dna鏈中都會有除目的基因外的多餘部分，只有到了第三次迴圈才會得到只有目的基因的dna鏈。
數字pcr和熒光pcr哪個更準確
在定量pcr時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是絕對定量呢？如今，你無需糾結了，因為數字pcr digital pcr 來了。儘管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區別。定量pcr是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數字pcr則讓你能夠直接數出dna分子的...
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夢妝和薇姿哪個適合我，請教夢妝系列，哪個更適合我。
用薇姿吧。lz 明顯需要藥妝調理下。夢妝可能太油了。或者可以換理膚泉。比薇姿好。我也用過薇姿。個人覺得很雞肋。當然因人而異了。但是理膚泉是真的好用的。那個痘痘清。還有特安潔面。最關鍵麼。還是要把內在調理好。注意飲食多喝水。調整作息。痘痘什麼的都是內在沒調理好。才顯出來的。個人覺得夢妝不錯 你可以選擇...