westernblot膜幹了怎麼辦

1樓：匿名使用者

膜幹了以後可以通過浸泡甲醇恢復，轉膜過程發生幹膜也可以這樣，但是會對結果有一定影響。就像樓上說的，孵育過抗體再晾乾就不能strip了，一般stripping 試劑盒說明書都有強調這個。如果要儲存膜可以浸泡在pbs或tbs中，4度放置。

注意：上過抗體的膜最好不要晾乾，可能會導致無法strip。

2樓：霓裳嵐嵐

如果是pvdf膜就沒事，你掃描了麼？有時候膜幹了條帶更清楚。如果是硝酸纖維素膜就有點麻煩，因為幹了一碰就碎，不知道你是不是用拍照的。

3樓：陳墨徹汗卯

個人建議時間不要再長了，再長蛋白有可能變性造成後續實驗無法進行。我原來遇到這類問題是用以下幾種方法嘗試解決的，你也可以嘗試一下

（1）檢查一下你的三明治結構夾的怎麼樣，尤其是膜及濾紙的邊緣是不是有短接的地方，這個是最容易出現的問題。另外膜和膠之間是不是有氣泡，不推薦用外力去擀壓膜和膠，推薦用緩衝液潤溼膜和膠之後，像做切片蓋蓋玻片一樣從一邊蓋下趕出氣體。要絕對確保沒有短接和氣泡，不然很容易出現轉膜不完全的問題。

（2）換成恆壓的試試，這個方案我不知道原理是什麼，但是有的時候確實能夠解決問題。

（3）換成半乾轉的方法，但是注意半乾轉更要確保沒有短接氣泡，而且時間不能過長，半乾轉的發熱量很大。我不清楚你的蛋白是不是需要活性，如果遇熱失活那就不能用這種方法。

（4）這個方法比較浪費，看老闆讓不讓你用了。換成品緩衝液商品，西格瑪的比較好。另外換24層濾紙成品，用一次不要再使用第二次。

還有就是還一個牌子的膜，我們實驗室曾經遇到過一個牌子的膜完全轉不出來的現象。

以上，希望你的問題早日能夠解決。

求助大神解答western blot這張膜上條帶周圍一團模模糊糊的東西，是怎麼造成的？

4樓：匿名使用者

這是你轉膜

的時bai候，膜和膠

du之間沒有很zhi好的貼合而導致的空dao泡。

轉膜時版一定要把膜和膠良好貼合才可權以，有一個訣竅是在轉膜緩衝液中浸泡著貼合，雖然費點緩衝液，但幾乎不會出現空泡現象了。

如果你用半乾轉的話，建議你換成溼轉法，也可以降低這個問題出現的概率。