1樓：傻蛋嘟嘟
顯然是選random primer更好，其bai實說明書是有du
寫的啦zhi，原因是rt-pcr逆轉錄是要得到一個dao所有的內rna的cdna庫，然後再容p出你要的「幾個基因」，所以不是每個基因的mrna都是有polya的，很多都是沒有的，microrna，pirna，很多都沒有哦，所以如果你用oligo dt引物，就自然會miss掉很多（確實是很多）的rna，而隨機引物不會有這個問題，用它反轉錄出來的cdna丰度更高，結果更加準確！！
普通pcr與real time pcr引物有區別嗎
2樓：幻之誰愚
熒光定量pcr，其引物和一般引物在構成上是沒內有什麼區別的，只
容是要更加註意引物二聚體、pcr產物大小等問題。染料法不需要其他東西，探針法還需要taqman探針，這個探針的設計是比較有講究的，並且上面有熒光集團和猝滅基團。
聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的dn**段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊dna複製，pcr的最大特點，是能將微量的dna大幅增加。
3樓：匿名使用者
有區別，熒光定量pcr引物，特異性更高。
4樓：匿名使用者
real time pcr引物設計是有特殊要求的，是跨越內含子的。
5樓：匿名使用者
如果real time pcr用的是染料法，那麼引物和普通pcr沒有太大分別，只是產物大小盡量在100-300bp間
設計real-time pcr的引物，mrna有多個變體，應該如何選擇
6樓：阿魯巴星人
首先，你要明確你要檢測的是什麼。如果你需要檢測guanylate cyclase 1，並且包括它所有的transcripts，那你就在這些transcripts 的保守序列上（就是每個transcripts都包含的序列）設計引物。如果你要檢測某一個transcript，那你就在這個特異的序列上設計引物。
rt-pcr與時時pcr的原理及引物有什麼區別?
7樓：惟鏞
rt-pcr和一般的pcr相比原理上沒有太多的區別，無非就是在反轉時候rna的定量，不同模板的設定。對引物沒有特別的要求，能特異代表目的基因就行。
real-time pcr根據原理的不同，引物選擇也不同。通常用的是sybr green的方法，這種方法引物在rt-pcr的基礎上需要注意：1.
退火溫度同內參；2.片段長度不要超過200；
real-time pcr的引物可以跑rt-pcr，反之不一定。
8樓：匿名使用者
rt-pcr就是將rna先反轉錄為cdna，在將轉錄得到的cdna作為模板進行pcr反應擴增目標片段。用於反轉錄的引物根據實驗的具體情況選擇隨機引物、oligo dt及基因特異引物的一種。對於短的不具有髮卡結構的真核細胞mrna三種都可。
隨機引物：適用於長的具有髮卡結構的rna。適用於rrna、mrna、trna等所有rna的轉錄反應。主要用於單一模板的rt-pcr反應。
oligo dt：適用於具有polya尾巴的rna。（原核生物的rna、真核生物的 oligo dt rrna和trna不具有polya尾巴。
）由於oligo dt要結合到polya 尾巴上，所以對rna樣品的質量要求較高，即使有少量降解也 會使全長cdna合成量大大減少。
基因特異引物：與模板序列互補，適用於目的序列已知的情況。
實時pcr也就是qpcr的基本原理與pcr也是一樣的，只是在體系中加入熒光指示，可以對pcr的模板進行定量。
一種是加入熒光染料sybr green，sybr green會嵌入雙鏈dna的小溝，且只有在嵌入小溝時才會發出熒光，熒光定量pcr沒進行一個迴圈就會對產物進行一次檢測，通過檢測每個迴圈後熒光強度（間接得知dna的量）從而檢測整個pcr的過程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析。sybr green不具有特異性，對結果稍有影響。
另一種是加入熒光探針taq man，pcr擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收；pcr擴增時，taqman探針在pcr體系中會與目標片段雜交，而在pcr的extension階段taq酶以一條鏈為模板合成目標片段，此時taq酶的5'－3'外切酶活性將結合在模板上的探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光訊號，即每擴增一條dna鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光訊號的累積與pcr產物形成完全同步。taq man 特異性強，只有被擴增出目標片段時，才有熒光發出，但是**昂貴。
9樓：匿名使用者
一樓的~real-time pcr不就是rt-pcr嗎？！實時定量pcr
realtime pcr引物和一般引物有何不同
10樓：匿名使用者
如果你做來
的事熒光定量源pcr，其引物和一般引物在構成上是沒有什麼區別的，只是要更加註意引物二聚體、pcr產物大小等問題。染料法不需要其他東西，探針法還需要taqman探針，這個探針的設計是比較有講究的，並且上面有熒光集團和猝滅基團。具體設計，一般使用相關軟體進行。
11樓：此時情緒
上下游引物所擴增出來的片段應保證能涵蓋熒光探針。
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