1樓：匿名使用者
1、 裂解液要預熱,以抑制dnase,加速蛋白變性,促進dna溶解.
2、 酚一定要鹼平衡.苯酚具有高度腐蝕性,飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷,因此應注意防護.氯仿易燃、易爆、易揮發,具有神經毒作用,操作時應注意防護.
3、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解.
4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾.
5、 異丙醇,乙醇.naac,kac等要預冷,以減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱.
6、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理.
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製.
在dna提取及純化過程中應注意哪些問題
2樓：長孫賢淑齊虹
dna提取有很多種方法，sds法,ctab法，高鹽低ph法，不同的材料方法會不同，像含多酚類糖類的材料就適合用ctab法，總的來說dna提取就是先把細胞破碎，一般是用液氮研磨然後再加入各種提取液，然後就使用酚氯仿異戊醇抽提然後就是用異丙醇或是乙醇沉澱在用75%的乙醇洗，純化過程就是加入rna酶除掉rna
然後再抽提沉澱過濾，總的來說就是這些步驟
dna提取需要注意什麼？
3樓：笨笨的弟弟
這個自己敘述不太好說，我做過基因工程的實驗。看了看這個，覺得還行，就給你複製下來了
1．固定劑對dna的影響固定劑的型別直接影響提取dna的質量。
2．固定時間對dna的影響固定過程中所發生的組織反應至今尚未被完全理解，雖然理論上講室溫下****與dna幾乎不發生的，但已發現鹼基與組蛋白之間的甲基交聯。這****介導的甲基化直接影響dna提取的效率。
3．固定溫度等其他因素對dna的影響核酸與固定劑的反應由反應成分、濃度、酸鹼度以及溫度等因素的調節，其中溫度效應顯得特別重要。
4．組織處理過程對dna的影響我們發現，從常規組織處理的蠟塊中提取的dna，其大部分分子量晨100bp－10000bp之間，主要分佈於100－1500bp，僅約1/3的組織所提取dna>20kb。這除與固定劑、固定時間等因素有關以外，可能的原因還有：①組織從外科切除到固定之間的時間長短下一。
當組織未固定或固定不充分時，核酸酶可自由作用；②不同腫瘤中核酸酶的水平不一，其在固定前或固定後均不發揮作用；③蠟塊貯存的地間長短不一。雖然本所獲得的dna分子量大。可能蠟塊中仍存在導致dna降解的因素。
組織的浸蠟和包埋溫度過高或時間過長，均可導致dna彎性，而產生單鏈dn**段。單鏈dna不能被限制性內切酶所消化，可導致電泳時泳動速率變慢
4樓：上海虹橋肝病科
你好！你是想做乙肝的病毒數檢查的話，是不需要準備什麼的，血液的檢查方式，到醫院抽血檢查就可以了！
5樓：匿名使用者
要注意的多了。每一步都要注意
ctab提取基因組dna應注意什麼
6樓：純粹臻美
trizol是一種新型總rna抽提試劑，可以直接從細胞或組織中提取總rna。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質，能迅速破碎細胞並抑制細胞釋放出的核酸酶。trizol在破碎和溶解細胞時能保持rna的完整性，因此對純化dna及標準化rna的生產十分有用。
ctab為十六烷基三甲基溴化銨，
ctab提取緩衝液的經典配方
tris-hcl (ph8.0)提供一個緩衝環境,防止核酸被破壞;
edta螯合mg2+或mn2+離子,抑制dnase活性;
nacl 提供一個高鹽環境,使dnp充分溶解,存在於液相中;
cβ-巰基乙醇是抗氧化劑,有效地防止酚氧化成醌,避免褐變,使酚容易去除基因組dna。
請採納!
植物總dna提取過程中應該注意哪些問題
7樓：北京索萊寶科技****
取樣的材料最要是新鮮的，而且取嫩葉，如果取老葉的話，含有較多的多糖和酚類物質等雜質，這樣加大了純化的難度。
磨樣時最好是加液氮，磨樣速度要快。一般用酚和氯仿抽提兩次，吸取上清時，一定要小心，不要把白色物質吸入。
抽提時不要有太力振動，操作也要仔細，儘量避免dna斷裂。
（僅供參考）
提取染色體dna的基本原理，操作中注意什麼
8樓：北京索萊寶科技****
提染色體dna的基本原理：
基因工程實驗所需要的基因組dna 通常要求分子量儘可能大，以此增加外源基因獲得率，但要獲得大片段的dna 非易事，細菌基因組dna通常是個很大的環狀態dna，而在抽提過程中，不可避免的機械剪下力必將切斷dna，如果要抽提到大的dna 分子，就要儘可能地溫和操作，減少剪下力，減少切斷dna 分子的可能性；分子熱運動也會減少所抽提到的dna分子量，所以提取過程也要儘可能在低溫下進行。另外細胞內及抽提器皿中汙染的核酸酶也會降解制備過程中的dna，所以製備過程要抑制其核酸酶的活性。
另外製備的細菌染色體dna 必須是高純度的，以滿足基因工程中各種酶反應的需要，製備的樣品必須沒有蛋白汙染，沒有rna，各種離子濃度應符合要求，這些在染色體制備時都應考慮到。
大腸桿菌染色體dna 抽提首先收集對數生長期的細胞，然後用離子型表面活性劑十二烷基磺酸鈉（sds）破裂細胞，sds 具有的主要功能是：（1）溶解細胞膜上的脂類和蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜；（2）解聚細胞膜上的脂類和蛋白質，有助於消除染色體dna上的蛋白質；（3）sds 能與蛋白質結合成為r1—0—so3 r2 —蛋白質的複合物，使蛋白質變性而沉澱下來。但是sds 能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以後的提取過程中，必須把它除乾淨。
以免影響下一步rnase的作用。破細胞後rna經rnase消化除去，蛋白質經苯酚、氯仿:異戊醇抽提除去經灑精沉澱**dna。
枯草桿菌染色體制備與上類似，但略加修改的方法要適合教學要求。枯草桿菌是格蘭氏陽性菌，所以在sds 處理前需要使用溶菌酶裂解細胞壁。溶菌酶是一種糖苷水解酶，它能水解菌體細胞壁的主要學成份肽聚糖中的β—1，4 糖苷鍵，有助於細胞壁破裂，破裂的細胞壁在sds 的作用下溶菌，同時用蛋白酶k 消化蛋白質，能解離纏繞在染色體dna上的蛋白質，然後加入一定量的醋酸鉀，使蛋白質變性，通常離心除去，在這期間可加入核糖酸酶消化rna，最後用乙醇**dna。
提染色體dna的注意事項：
1、 重點防止dna的損傷，包括各種物理、化學和機械損傷。
2、 乾燥好的染色體dna最好溶於去離子水，以備後面直接利用。如果用te 緩衝液溶解，後面還需去離子。
3、 取上清時，如果上清液過少，可再加入少量水，重新離心，取上清，避免dna損失過多。
9樓：匿名使用者
dna與組蛋白構成核小體，核小體纏繞成中空的螺旋管狀結構，即染色絲，染色絲再與許多非組蛋白形成染色體。染色體存在於細胞核中，外有核膜及胞膜。從組織中提取dna必須先將組織分散成單個細胞，然後破碎胞膜及核膜，使染色體釋放出來，同時去除與dna結合的組蛋白及非組蛋白。
注意事項：
1.儘量簡化操作步驟，縮短提取過程，以減少各種有害因素對核酸的破壞。 減少化學物質對dna的降解，為避免過酸、過鹼對dna雙鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在ph值4.
0-10.0的條件下進行。
2.防止基因組dna的生物降解，主要是dnase降解基因組dna，dnase需二價金屬陽離子如mg2+等的啟用，可用edta等金屬離子螯和劑螯和mg2+以抑制dnase的活性。
3.減少物理因素對dna的降解，物理降解因素主要包括機械剪下力(如劇烈振盪、攪拌等)，細胞突然置於低滲液中導致的細胞**式破裂，dnase大量釋放，樣品反覆凍融和高溫等。
細菌基因組dna提取時常遇到哪些問題怎樣解決
10樓：古弘文欒琦
細菌基因組dna的提取方法綜述，提供了五種方法。
一、快速微量提取法
a.取1.5ml菌體培養物於一滅菌ep管中，12000rpm離心1min,
丟去上清夜，收集菌體。
b.加入400ul裂解液（40mmtris-醋酸，20mm醋酸鈉,1mmedta,1%sds,ph7.8）混勻,置於37oc水浴1hr。
c.然後加入200ul5mol/l的氯化鈉溶液，混勻後於13000rpm離心15min。
d.取上清液，用苯酚抽提2次，氯仿抽提1次。
e.加兩倍體積無水乙醇，1/10體積醋酸鉀(3m
,ph8.0)，-20度儲存1小時後，13000rpm離心15min，棄上清液，沉澱用70%乙醇洗2次；置於室溫乾燥後，溶於50ulte溶液中，置4℃儲存備用。
二、蛋白酶/sds法制備
先用10ml含適當抗生素的gbm過夜培養delftia
sp.，第二天4000rpm離心10min收集菌體，用washing
te（50mmol/ltris-hcl
ph8.0,10mmol/ledta
ph8.0）洗菌體2次，之後將菌體充分懸浮在5ml
1×te緩衝液中，先後加入0.5ml
5mg/l的蛋白酶、0.5ml
10%sds，輕輕混勻後50℃放置3h~5h，接著用等體積的tris飽和苯酚抽提2次，苯酚/氯仿/異戊醇抽提一次，氯仿抽提一次後，乙醇沉澱dna，用自動移液器吸管頭將絮狀dna沉澱塊吸附到ep管中，70%乙醇洗2次，乾燥後溶於適當1×te或ddh2o中。
三、1)
細菌培養：細菌接種於5ml液體培養基中，37℃搖床（300rpm）培養過液。
2)細菌收集：取1ml培養物於1.5ml
ep管中，室溫8000rpm離心5min，棄上清，沉澱重新懸浮於1ml
te（ph8.0）中（用ddh2o也行)。
3)菌體裂解：加入6μl
50mg/ml的溶菌酶，37℃作用2h。再加2mol/lnacl50μl，10%sds
110μl，20mg/ml的蛋白酶k
3μl，50℃作用3h或37℃過夜。（此時菌液應為透明粘稠液體）
4)抽提：菌液均分到兩個1.5ml
ep管，加等體積的酚∶氯仿∶異戊醇(25∶24∶1)，混勻，室溫放置5-10min。12000rpm離心10min。抽提兩次。（上清很粘稠，吸取時應小心，最好槍頭尖應剪去）
5)沉澱：加0.6倍體積的異丙醇，混勻，室溫放置10min。1
2000rpm離心10min。
6)洗滌：沉澱用75%的乙醇洗滌。
7)抽（涼）幹後，溶於50μl
ddh2o中，取2-5μl電泳。作pcr模板用。
交友應注意什麼，交朋友過程中應該注意哪些問題
交友要交君子之交。君 子之交，確是知己之交的最美妙篇章。君子之交，可以超越貧富 身份等等的差別，可以超越民族 語言 年齡和地域等等的隔閡。君子之交，注重的是心的相通，而不僅是酒肉意氣的相投。還是古人說得好 君子之交淡若水，小人之交甘若醴 君子淡以親，小人甘以絕。交朋友過程中應該注意哪些問題?對於 交...
電感線圈在繞線過程中應注意哪些事項
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隨著大家現在的生活水平逐漸提高，車輛也越來越多，交通事故也是頻繁發生，事故有輕重之分，對於那些傷情比較嚴重的當事人，就需要有具備鑑定資質的鑑定機構來對傷情進行鑑定，鑑定機構可以由律師事務所委託，也可以由事故處理大隊委託。那麼有很多當事人對傷殘鑑定需要注意的事項有疑問，接下來我就簡單說一下。首先，在交...