1樓：沙古利費斯
不用，基因匯入載體時才要篩選。
2樓：刀劍信譽
基因工程的基本操作程式：
1、目的基因的獲取
（1）目的基因是指： 編碼蛋白質的結構基因。
（2）獲取方法：①從基因文庫中獲取；②人工合成（反轉錄法和化學合成法）；③pcr技術擴增目的基因。
2、基因表達載體的構建
（1）目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。
（2）組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。如圖：
①啟動子：是一段有特殊結構的dn**段，位於基因的首端，是rna聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mrna，最終獲得所需的蛋白質。
②終止子：也是一段有特殊結構的dn**段，位於基因的尾端。
③標記基因的作用：是為了鑑定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。常用的標記基因是抗生素基因。
（3）基因表達載體的構建過程：
3、將目的基因匯入受體細胞
（1）轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，並且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。
（2）常用的轉化方法：
生物種類 植物細胞 動物細胞 微生物細胞
常用方法 農桿菌轉化法 顯微注射技術 ca2+處理法
受體細胞 體細胞 受精卵 原核細胞
轉化過程 將目的基因插入到ti質粒的t-dna上→農桿菌→匯入植物細胞→整合到受體細胞的dna→表達 將含有目的基因的表達載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發育→獲得具有新性狀的動物 ca2+處理細胞→感受態細胞→重組表達載體與感受態細胞混合→感受態細胞吸收dna分子
（3）重組細胞匯入受體細胞後，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。
4、目的基因的檢測和表達
（1）首先要檢測轉基因生物的染色體dna上是否插入了目的基因，方法是採用dna分子雜交技術。
（2）其次還要檢測目的基因是否轉錄出mrna，方法是用標記的目的基因作探針與mrna雜交。
（3）最後檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原--抗體雜交。
（4）有時還需進行個體生物學水平的鑑定。如轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀。
知識點撥：
1、構建基因文庫的目的為了在不知目的基因序列的情況下，便於獲得所需的目的基因。
2、pcr技術：是一項在生物體外複製特定dn**段的核酸合成技術。pcr擴增是獲取目的基岡的一種非常有用的方法，也是進行分子鑑定和檢測的一種很靈敏的方法。
目的：通過指數式擴增獲取大量的目的基因。
3、基因文庫中不是直接保管相應基因，基因文庫中的基因儲存在受體菌中。
4、在基因工程的四個操作步驟中，只有第三步將目的基因匯入受體細胞不需鹼基互補配對，其餘三個步驟都涉及鹼基互補配對。
5、原核生物繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，有利於目的基因的複製與表達，因此常用大腸桿菌等原核生物作為受俸細胞。
6、植物細胞的全能性較高，可經植物組織培養過程成為完整植物體，因此受體細胞可以是受精卵也可以是體細胞；動物基因工程中的受體細胞一般是受精卵。
7、轉化的實質是目的基因整合到受體細胞染色體基因組中，從而使受體生物獲得了新的遺傳特性的現象，從其變化的實質看，這種變異屬於可遺傳變異中的基因重組。
知識拓展：
1、基因文庫的構建：
（1）概念
①基因組文庫：含有一種生物的全部基因。將含有某種生物不同基因的許多dn**段，匯入受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因組文庫。
②cdna文庫：只包含了一種生物的部分基因。
（2）構建過程
基因組文庫的構建 cdna文庫的構建
2、人工合成目的基因
（1）反轉錄法：
（2）人工合成目的基因
3、pcr技術擴增目的基因
①原理：dna雙鏈複製
②過程：
第一步：加熱至90～95℃dna解鏈；
第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補dna鏈；
第三步：加熱至70～75℃，熱穩定dna聚合酶從引物起始互補鏈的合成。
基因工程操作步驟，將載體匯入受體細胞之後，目的基因是怎麼複製的？引物是幹什麼的？
3樓：東晶
目的基因是通過bai
限制性du內切酶的作用連線在zhi
載體上的，並且不dao影響載體的功能，而載體是版一種質粒或是權
噬菌體，在細菌（如大腸桿菌）中有自主複製功能，這樣你的目的基因就複製且表達啦。引物當然是用來擴增目的基因片段的啊！多看看書
吳乃虎的，基因工程
4樓：匿名使用者
目的複基因隨著制載體的複製而復bai制。du
引物是pcr過程中的zhi新增物，詳見dao
5樓：匿名使用者
目的基因整合到受體細胞中，隨受體細胞的dna複製而複製。
引物是一段短的單內
鏈rna或dn**段，可結合
容在核酸鏈上與之互補的區域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點，核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。
高中生物：基因工程的知識點有什麼？
6樓：匿名使用者
我這裡的是一個**格式的 插入失敗啊 你把郵箱給我我發給你
為什麼把目的基因匯入受體細胞要用載體？
7樓：魚骨頭愛游泳
要考慮目的基因在細胞中表達，直接匯入目的基因無法表達，沒有表達即轉錄相關的原件，而載體具有！
8樓：123來不及
細胞中外來的dna一般都會被降解掉，而且，就算進到細胞中，還要能複製，能表達才行。載體是自然條件下可以進入細胞，並且能夠複製和表達的dna，所以必需要藉助載體才能進入受體細胞。
pcr只能擴增基因片段，並不能表達，目前還沒有脫離細胞進行的表達過程。
9樓：靜軒散人
首先pcr利用的是dna在不同溫度下的變性和復性，與在細胞中的複製是不一樣的。
*************************===就像你說的，用到質粒的原因實際上就是啟動子，終止子，複製原點和標記基因，如果目的基因上有了他們很可能就不用質粒了，可是目的基因上可能有這些東西都有嗎？
事實上質粒上的啟動子和終止子也是後來做上去的，因為它需要適合受體細胞，能讓受體細胞識別。
10樓：匿名使用者
對的，不一定需要載體。
只要你p出來的片段是完整的，外界條件適當，啟動子響應，啟動子下游的目的基因(orf)就有機會轉錄表達出來。(pcr-->切膠**-->轉化-->篩選) （注意是有機會！機會是否比載體匯入的大，不一定。
）通過載體匯入的好處，一是量產；二是有篩選基因方便挑選transformants；三是方便下游的鑑別。
11樓：匿名使用者
遊離的dna進入細胞體,一般會直接被分解,就算可以進行轉錄——翻譯成蛋白,遊離dna也無法跟著細胞**進行復制,導致子代細胞中不再含有目的基因,也就是說,你費力將基因匯入受體細胞,結果只有一個細胞被改變了,整個群體細胞菌落不會有可觀察的任何變化.
而將基因接入載體,由於載體可以在細胞內複製,隨著細胞**,載體會帶著目的基因存在於每個子代細胞中,最終整個菌落髮生可以觀察到的變化,基因工程才有意義.
基因工程是一個巨集觀提取——微觀改造——巨集觀檢驗的過程,就是依靠各種載體實現的
基因工程運載體，基因工程運載體的必備條件
目的基因單獨匯入受體細胞很難而且也無法直接與受體細胞的基因結合。一方面需要用它作為運載工具，將目的基因轉移到宿主細胞中去 另一方面利用它在宿主細胞內對目的基因進行大量的複製 稱為克隆 作為運載體必須具有三個條件 在宿主細胞中能儲存下來並能大量複製 有多個限制酶切點，而且每種酶的切點最好只有一個 有一...
基因工程中載體，運載體，表達載體之間的區別是什麼
基因工程中的基本工具之一 分子運輸車 就是載體或者說運載體，常用的載體是質粒，但是天然的質粒往往不能直接作為載體，它上面可能缺少一些基因表達所需的調控元件，要想使目的基因在受體細胞中穩定存在並表達必須構建基因表達載體，也就是對天然質粒進行加工，加上啟動子 標記基因 目的基因 終止子等元件。基因工程中...
基因工程中轉化的方法有哪些 什麼是載體轉化法
我補充一下 慕翊徵 童鞋的。還有我國自主研發的 花粉管通道法 嘻嘻 例如我國的抗蟲棉 bt病毒基因 的就是運用這種方法。你想問偏微生物的，植物的，還是動物的基因工程？它們之間是有一定差異的。常用的基因工程載體有哪些 您好！三種常用的載體是質粒 噬菌體的衍生物和動植物病毒，最常用的是質粒。在基因操作過...