1樓：南京金益柏
酶聯免疫吸附試驗(enayme liked immunosorbent assay，elisa)是20世紀70年代發展起來的一種檢測技術，因其具有敏感性高、特異性強、操作簡單等優點，被廣泛應用於各種抗原和抗體的測定，為輔助臨床診斷與生物科研起到了積極的推動作用。但elisa測定中影響因素較多，操作過程中每個環節都會對試驗結果產生影響，出現錯誤的結果。現筆者對影響實驗結果的常見因素及相應的控制方法分析**如下：
1試劑的因素
1.1試劑的選擇
試劑的選擇是保證血液檢測質量的關鍵要素。雖然國家採用批批檢定的形式對elisa試劑嚴格把關，但不同廠家的試劑在使用效果上仍存在在差異。要選購知名度相對高、具有「三證」的試劑，不要用無批號的試劑，最好選用與儀器配套的試劑。
更不要使用過期的試劑和混用不同批號的試劑。
1.2試劑的準備
在臨床實驗室，對試劑的準備一般不太注意，通常的做法是在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響後面時間不夠的問題，其直接的後果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因此，在elisa測定中試劑的準備最為關鍵的是，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min後，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足後面的測定需求。
2樣本的因素
2.1內源性干擾因素
包括類風溼因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等。
2.1.1類風溼因子在類風溼患者及正常人血清中，常含有較高或不同濃度的類風溼因子(rf)，其一般為igm型，亦有igg和iga型，具有與變性igg產生非特異結合的特點，因為在elisa測定中，其可與固相上包被的特異抗體igg以及隨後加入的酶標的特異抗體igg結合，從而出現假陽性結果。
避免其發生的方法有：①用f(ab)2替代完整的igg。②標本用聯有熱變性igg的固相吸附劑處理。
③檢測抗原時，可用2-巰基乙醇加入到標本稀釋液中使rf降解。
2.1.2補體在固相酶免疫測定中，來自哺乳動物的固相抗體和酶標二抗均有啟用人補體系統的功能。
一方面，固相抗體和酶標二抗可因其吸附及結合過程中抗體分子發生變構，使fc段的補體c1q結合點暴露出來，使c1q成為一箇中介物將二者交聯起來出現假陽性結果。另一方面，固相抗體也會因為活化補體的結合，封閉抗體和抗原的表位結合能力而引起假陰性。解決的辦法是：
①用edta稀釋標本。②56℃ 30 min加熱血清使c1q滅活。
2.2外源性干擾因素
包括標本溶血、標本被細菌汙染、標本儲存時間過長和標本凝固不全等。
2.2.1標本的溶血血紅蛋白中含鐵血紅素有類過氧化物酶的活性，因此，在以辣根過氧化物酶(hrp)為標誌的elisa測定中，如血清樣本中血紅蛋白濃度較高，則很容易在溫育過程中吸附於固相，從而與後面加入的hrp底物反應顯色。
所以在採血時應注意手法，採集的血液勿用力振盪，嚴防標本溶血。
2.2.2標本的汙染菌體可能含有內源性辣根過氧化物酶，可使實驗出現非特異性顯色。
因此，elisa檢測宜採集新鮮標本，如不能當時測定，5 d之內應4℃儲存，1周後檢測應低溫凍存；同時，收集標本採用無菌試管，可防止標本的汙染。
2.2.3標本的儲存標本在冰箱中儲存過久，血清中igg可聚合成多聚體，afp可形成二聚體，在用間接法測定中會導致本底過深，甚至造成假陽性。
冰凍儲存的標本反覆凍融產生機械剪下力對標本中的蛋白等分子有破壞作用，可引起假陰性結果。因此，elisa檢測儘量採用新鮮標本，長時凍存的樣本避免反覆融凍[3]。
2.2.4標本凝固不全凝固不全的血清中含有部分纖維蛋白原，可使結果呈假陽性。
解決的方法有：①於採血管中加入適當的抗凝劑；②將採集後的血液放在架子上再放入37℃水浴中1 h，待充分凝固後再離心分離血清[4]。
3操作中的因素
3.1加樣 孵育前加樣時間過長，酶試劑加出孔外，使用滴瓶滴加試劑時，滴加的角度不同和擠壓的力度不同，致使滴加的試劑量不準，都可導致試驗結果不準確。控制方法：
①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；②加酶試劑後，用吸水紙吸乾孔外試劑；③作定量試驗時，使用加樣器加註試劑，並經常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉汙染。
3.2溫育 溫育是elisa測定最為關鍵、最容易出現問題的步驟。最為常見的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2-8℃。
目前國內售elisa試劑盒溫育時間為37℃，30 min-1 h，進口elisa試劑盒則通常為37℃，1-2 h能有較完全的結合。
3.2.1溫育時間、溫度的選擇一般根據試劑盒的說明書選擇溫育的時間、溫度。
加完樣本和（或）試劑後將微孔板從室溫放入水浴箱或溫箱中時，孔內溫度從室溫升至37℃需要一定時間，如果是將微孔板一放入溫箱即開始計時，這樣就容易造成實際測定中溫育時間不夠，易致弱陽性標本測不出來。控制方法：①如有兩種溫度，儘量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件；②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察。
3.2.2 「邊緣效應」的排除「邊緣效應」是在使用96孔板的elisa測定中，外周孔顯色較中心孔深的現象。
產生的原因可能是為96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度造成的，因此在溫育時儘量採用水浴。
3.3洗板 elisa測定的洗板一般有兩種方式，即手工和洗板機洗板。採用手工洗板，孔與孔之間液體易交叉，採用半自動洗板機時，洗液量不足導致洗板不徹底，洗板針堵塞導致抽吸不完全，洗板不暢導致清洗效果差。
控制方法：①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉汙染，用力不能過猛，防止抗原抗體複合物脫離；②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；③為了洗滌效果好，實驗室可採用機器與人工洗滌相結合的方法，在機器洗滌後再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數，有資料報道洗板7次能達到理想的洗滌效果[5]。
3.4顯色 市售elisa試劑盒中，如以四甲基聯苯胺(tmb)為底物，則提供的底物為a和b兩瓶應用液；如以鄰苯二胺(opd)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。
以鄰苯二胺(opd)為底物的試劑，要臨用前30 min配製且必須避光。以四甲基聯苯胺(tmb)為底物的試劑則不需避光，但a、b液應儘量避免接觸金屬器械。
3.5結果判定
讀取結果要在15-30 min內完成，定性測定用肉眼判讀試驗結果時，反應板應水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結果，酶標儀不應置於陽光或強光照射下，需先預熱15-30 min再進行測試。
綜上所述，儘管elisa法操作簡單，但可能影響測定結果的因素也較多。故在實際操作的過程中，要加強質量管理，認真避免或減少影響因素，力求結果準確，為疾病的診斷和科研提供可靠的依據。
2樓：武漢博歐特生物
操作步驟:
1. 包被過程(注意設定空白對照,陰性對照):
將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl, 置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發,板上應加蓋或將板平放在底部有溼紗布的金屬溼盒中)
2. 封閉酶標反應孔:
5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時將封閉液加滿各反應孔,並去除各孔中的氣泡,封閉結束後用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.
洗滌方法:吸乾孔內反應液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動,吸乾孔內液,傾去液體後在吸水紙上拍幹
洗滌次數3次
3. 加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度):
檢測時一般採用1:50-1:400的稀釋度, 應採用較大稀釋體積進行,一般保證樣品吸取量》20μl.
將稀釋好的樣品加入酶標反應孔中,每樣品至少加雙孔, 每孔100μl,置於37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.
4. 加入酶標抗體:
酶標抗體: 根據酶結合物提供商提供的參考工作稀釋度進行. 37℃,30-60min之間.短於30min往往結果不穩定.每孔加100μl.洗滌同前。
5. 加入底物液(現用現配):
首選tmb-過氧化氫尿素溶液,opd-過氧化氫底物液系統次之.
底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鐘,加入終止液顯色.
6. 終止反應:
每孔加入終止液50μl終止反應,於20min內測定實驗結果.
7. 結果判斷:
opd顯色後採用492nm波長,tmb反應產物檢測需要450nm波長.檢測時一定要首先進行空白孔系統調零.用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(p/n)表示,當p/n大於2時作為抗體的效價.
(數值的大小依具體檢測要求而定.)
電腦是什麼東西
3樓：柯靖輝
計算機（computer）全稱：電子計算機，俗稱覆電腦，是一種能夠按照程式運制行，自動、高速處理海量資料的現代化智慧電子裝置。由硬體和軟體所組成，沒有百安裝任何軟體的計算機稱為裸機。
常度見的形式有臺式計算機、筆記本計算機、大型計算機等，知較先進的計算道機有生物計算機、光子計算機、量子計算機等。
電腦的好處和壞處
4樓：無敵閃電俠
一、bai好處：
1、 網路遊
du戲可以放鬆心情，釋放zhi壓力，提dao高反應能力。
2、 在網路遊版戲權上我們可以開闊視野，隨心所欲，不受任何控制。
3、 上網玩遊戲
讓雙手變得敏捷、提高打字水平和電腦知識的應用。
4、 網路可以結識更多的朋友，增強社交能力。
5、 有些網路遊戲可以增添學習樂趣。
6、 網路對我們的工作學習有很大的幫助，像查資料等等。
7、 可以網上購物。
二、壞處：
1、 影響視力，白天上課沒有精神，學習下降。
2、 讓我們過分沉迷於網路，難以自拔。
3、 電腦的輻射會影響健康。
4、 玩遊戲會讓我們走上歪路，染上不良惡習。
5、 玩遊戲會導致脾氣暴躁，對學習失去興趣。
6、 玩遊戲會讓我們拋棄學業，走向犯罪。
7、 迷戀上網還會到處亂花錢，進入黑吧等地方
月入一萬真的很簡單嗎
我認為，月入一萬真的不簡單，而不是很簡單。巨集觀現在的各行各業以及就業形勢，縱些有許許多多能夠掙到錢的職業 機會和平臺，但是實事求是地說，要想輕輕鬆鬆，很簡單地就可以掙到每月一萬塊錢，還真的不是一個平常容易的事情。憑藉簡單的體力活，顯然不能月入一萬。腦力技術活雖然能每月一萬，但又不是一般人能幹得了的...
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