1樓：哀煙宮培
如果用普通pcr檢測不到條帶是因為擴增模板量太低造成的，為了提高檢測靈敏度和特異性，可以採用巢式pcr。其優點是：
1、克服了單次擴增平臺期效應的限制，使擴增倍數提高，從而極大的提高了pcr的敏感性；
2、由於模板和引物的改變，降低了非特異性反應連續放大進行的可能性，保證了反應的特異性；
3、內側引物擴增的模板是外側引物擴增的產物，第二階段反應能否進行，也是對第一階段反應正確性的鑑定，因引可以保證整個反應的準確性及可行性。
但其亦有缺點：
進行第二次pcr墳增引起交叉汙染的機率大。為了克服此缺點，可彩用同一反應管中巢式pcr，主要利用內外引物tm值不同。
如果你已排除引物，酶，rna提取，逆轉錄等等其他原因引起的pcr不成功，確定關鍵原因是模板量低的話，可以用巢式。但還是建議先排除一下其他可能因素，畢竟普通pcr簡單。
2樓：蓬來福華亥
其優點是：
1、克服了單次擴增平臺期效應的限制，使擴增倍數提高，從而極大的提高了pcr的敏感性；
2、由於模板和引物的改變，降低了非特異性反應連續放大進行的可能性，保證了反應的特異性；
3、內側引物擴增的模板是外側引物擴增的產物，第二階段反應能否進行，也是對第一階段反應正確性的鑑定，因引可以保證整個反應的準確性及可行性。
但其亦有缺點：
進行第二次pcr墳增引起交叉汙染的機率大。為了克服此缺點，可彩用同一反應管中巢式pcr，主要利用內外引物tm值不同。
如果你已排除引物，酶，rna提取，逆轉錄等等其他原因引起的pcr不成功，確定關鍵原因是模板量低的話，可以用巢式。
pcr技術和 基因工程的優缺點分別是什麼
巢式pcr相對普通pcr的優缺點有哪些
3樓：匿名使用者
其優點是：
1、克服了單次擴增平臺期效應的限制，使擴增倍數提高，從而極大的提高了pcr的敏感性；
2、由於模板和引物的改變，降低了非特異性反應連續放大進行的可能性，保證了反應的特異性；
3、內側引物擴增的模板是外側引物擴增的產物，第二階段反應能否進行，也是對第一階段反應正確性的鑑定，因引可以保證整個反應的準確性及可行性。
但其亦有缺點：
進行第二次pcr墳增引起交叉汙染的機率大。為了克服此缺點，可彩用同一反應管中巢式pcr，主要利用內外引物tm值不同。
如果你已排除引物，酶，rna提取，逆轉錄等等其他原因引起的pcr不成功，確定關鍵原因是模板量低的話，可以用巢式。
什麼叫巢式pcr
4樓：南京金益柏生物科技****
就是多重pcr,第一次獲得產物濃度不夠,但迴圈數過多會造成產物質量不好,就會以第一次pcr產物為模板,設計內引物進行第二次擴增,獲得高質量產物
5樓：
巢式pcr是一種變異的聚合酶鏈反應(pcr)，使用兩對（而非一對）pcr引物擴增完整的片段。第一對pcr引物擴增片段和普通pcr相似。第二對引物稱為巢式引物（因為他們在第一次pcr擴增片段的內部）結合在第一次pcr產物內部，使得第二次pcr擴增片段短於第一次擴增。
巢式pcr的好處在於，如果第一次擴增產生了錯誤片斷，則第二次能在錯誤片段上進行引物配對並擴增的概率極低。因此，巢式pcr的擴增非常特異。
6樓：匿名使用者
形象點兒說就像鳥巢，兩對兒引物，一對擴長片段，一對兒設計在長片段內，這樣做的好處是，提高擴增效率和特異性
7樓：百替生物
巢式pcr（nest pcr），使用兩對引物對目的基因進行擴增的一種pcr技術。首先在該基因起始密碼子上游數百bp和終止密碼子下游數百bp位置設定一對引物，這對引物由於可操控性大，可以將tm值，引物結構等設定到最佳。或者可以通過軟體自動分析，由機器給出引物序列。
然後再在目的基因的準確位置設計第二對引物。
在進行pcr時，先用第一對引物進行擴增，擴增後跑膠檢測，如果此時跑膠已經可以檢測出較好的條帶，可以進行**純化，再將**產物作為模板，用第二對引物進行第二輪擴增。如果第一輪產物跑膠時看不清楚條帶，則可以將產物適當稀釋，以此作為第二輪的模板進行擴增，一般在第一輪以低拷貝量存在的dna通過第二輪的擴增都可以成功獲得的。祝你成功。
想要獲得基因克隆，真核或者原核表達載體的話，我們百替生物也可以提供此類服務！公司
巢式pcr的原理
8樓：匿名使用者
dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在dna聚合酶與啟動子的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子挎貝。在實驗中發現，dna在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。
因此，通過溫度變化控制dna的變性和復性，並設計引物做啟動子，加入dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
但是，dna聚合酶在高溫時會失活，因此，每次迴圈都得加入新的dna聚合酶，不僅操作煩瑣，而且**昂貴，制約了pcr技術的應用和發展。
發現耐熱dna聚合同酶--taq酶對於pcr的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個迴圈加酶，使pcr技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，pcr技術得以大量應用，並逐步應用於臨床。
pcr技術的基本原理 類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板dna的變性：
模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板dna與引物的退火(復性)：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。
每完成一個迴圈需2～4分鐘， 2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
9樓：匿名使用者
巢式pcr（nested pcr），是指利用兩套pcr引物（巢式引物）對進行兩輪pcr擴增反應。
在第一輪擴增中，外引物用以產生擴增產物，此產物在在內引物的存在下進行第二輪擴增。
由於巢式pcr反應有兩次pcr擴增，從而降低了擴增多個靶位點的可能性（因為與兩套引物都互補的引物很少）增加了檢測的敏感性；又有兩對pcr引物與檢測模板的配對，增加了檢測的可靠性。
一般應用於動物方面。如：病毒，梅毒螺旋體，hiv，腫瘤基因等
巢式pcr，可以在10的六次方基因組背景下檢測到一個拷貝的病毒基因，也不像二次pcr容易產生成片的產物，是效果最好的pcr，但也因此是最容易汙染的pcr
什麼是巢式pcr？有什麼應用？
10樓：仙昶
巢式pcr是指利用兩套pcr引物進行兩輪pcr擴增反應。第一輪擴增中，外引物產生擴增產物，此產物在內引物的存在下進行第二輪擴增。
一般用於病毒基因的特異性檢測，可以在10`6基因組背景下檢測到一個拷貝的病毒基因。
11樓：南霧嶺後
又稱over-lap pcr, 就是 pcr裡面套pcr。具體是針對某基因，在兩組引物之間的某些地方，再設計兩組引物，用於某特定用途的擴增，如：如用於基因點突變，基因片段連線，基因位點檢測，等等。
12樓：匿名使用者
利用鹼基互補配對原則 擴增目的基因（dna）的技術 轉基因工程裡有用到這項技術
戶型優缺點，戶型優缺點分析 好房子的標準有哪些
南方一般都是座北朝南，這樣主臥 客廳等不會出現西晒情況 房間和牆體設定一是節約原則，看建築面積和使用面積比例，使用面積過小自然不划算，二是看功能，比如有的戶型保留了長廊，有的客廳四面都是門洞，不利於佈置與使用。付費內容限時免費檢視 回答2.餐廳 廚房太小不實用。作為南北通透的四房設計,有過道是必然的...
嵌入式的衣櫃都有哪些優缺點？內嵌衣櫃都有哪些優缺點
隨著經濟的發展生活水平的提高但隨著購房壓力的增大很多人在買房時會考慮購買小公寓，小公寓的寢室內部傢俱衣櫃被特別佔用。為了提高寢室的使用面積，很多人正在考慮建造內建衣櫃。進入壁櫥的衣櫃也被稱為整個衣櫃，是嵌在牆上的衣櫃。事實上，進入壁櫥是把兩面牆壁當作衣櫃的側面，形成嵌在牆壁上的衣櫃形狀。進入壁櫥可以...
開放式廚房設計的優缺點有哪些，開放式廚房優缺點具體是哪些？
不管是什麼事物都有兩面性，有利肯定就有弊，開放式廚房設計能夠讓客廳更加寬敞，看起來也好非常的漂亮大氣，時尚，但是油煙問題太嚴重了，只要將這個問題解決了就可以，建議使用整合灶來解決油煙問題，火星人除油煙能力很強的，而且保證能讓廚房乾乾淨淨 1 油煙 油煙一直是開放式廚房富有爭議的地方，其實與其說油煙問...