1樓:黃昏的狂
根據分離的物件是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物,凝膠色譜又可分為凝膠過濾色譜(gfc)和凝膠滲透色譜(gpc)。
凝膠過濾色譜。
凝膠過濾色譜一般用於分離水溶性的大分子,如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列,洗脫溶劑主要是水。
凝膠滲透色譜法。
凝膠滲透色譜法主要用於有機溶劑中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相對分子質量分佈分析及分離,常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠,洗脫溶劑為四氫呋喃等有機溶劑。
凝膠色譜不但可以用於分離測定高聚物的相對分子質量和相對分子質量分佈,同時根據所用凝膠填料不同,可分離油溶性和水溶性物質,分離相對分子質量的範圍從幾百萬到100以下。
凝膠色譜也廣泛用於分離小分子化合物。化學結構不同但相對分子質量相近的物質,不可能通過凝膠色譜法達到完全的分離純化的目的。
2樓:汝潔但卿
一)聚丙烯醯胺凝膠:
是一種人工合成凝膠,是以丙烯醯胺為單位,由甲叉雙丙烯醯胺交聯成的,經乾燥粉碎或加工成形制成粒狀,控制交聯劑的用量可製成各種型號的凝膠。交聯劑越多,孔隙越小。聚丙烯醯胺凝膠的商品為生物膠-p
bio-gel
p),由日本tosoh的tskgel的pw系列,適合蛋白和多糖的純化。
二)交聯葡聚糖凝膠(sephadex)
sephadex
g交聯葡聚糖的商品名為sephndex,不同規格型號的葡聚糖用英文字母g表示,g後面的阿拉伯數為凝膠得水值的10倍。例如,g-25為每克凝膠膨脹時吸水克,同樣g-200克每克千膠吸水20克。交聯葡聚糖凝膠的種類有g-10,g-15,g-25,g-50,g-75,g-100,g-150,和g-200。
因此,「g」反映,凝膠的交聯程度,膨脹程度及分部範圍。
sephadex
lh-20,是—sephadex
g-25的羧丙基衍生物,能溶於水及親脂溶劑,用於分離不溶於水的物質。
三)瓊脂糖凝膠:
商品名很多,常見的有,sepharose(瑞典,pharmacia,bio-gel-a(美國bio-rad)等。瓊脂糖凝膠是依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網狀結構,網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。一般情況下,它的結構是穩定的,可以在許多條件下使用(如水,ph4-9範圍內的鹽溶液)。
瓊脂糖凝膠在40℃以上開始融化,也不能高壓消毒,可用化學滅菌活處理。
四)聚苯乙烯凝膠。
商品為styrogel
具有大網孔結構,可用於分離分子量1600到40,000,000的生物大分子,適用於有機多聚物,分子量測定和脂溶性天然物的分級,凝膠機械強度好,洗脫劑可用甲基亞碸。
凝膠色譜法的原理
3樓:網友
凝膠色譜法的原理是:凝膠色譜法的固定相為多孔性凝膠類物質,流動相為水溶液或有機溶劑,它是根據不同組分子體積的大小進行分離的。小分子可以擴散到凝膠空隙,由其中通過,出峰最慢;中等分子只能通過部分凝膠空隙,中速通過,而大分子被排斥在外,出峰最快;溶劑分子宴洞小,故在最後出峰,全部在死體積前出峰;可對相對分子質量在100-105範圍內的化合物按質量鄭輪分離。
凝膠色譜,又稱為分子排阻色譜,其分離物質的原理為分子篩原理,且多用於分離有機大分子化合物,如蛋白質、多肽、多糖等。對高分子物質有很高的分離效果。大分子物質由於直徑較大,不易進入凝膠顆粒的微孔,而只能分佈顆粒之間,所以在洗脫時向下移動的速度較快。
小分子物質除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外,還可以進入凝膠顆粒的微孔中,即進入凝膠相內,在向下移動的過程中,從乙個凝膠內擴散到顆粒間隙後再進入另一凝膠顆粒,如此不斷地進入和擴散,小分子物質的下移速度落後於大分子物質,從而使樣品中分子大的先流出色譜柱,中等分子的後流出,分子最小的最後流出 。
分子篩效應:乙個含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經凝膠色譜柱時,各分子在柱內同時進行著兩種不同的運動,垂直向下的移動和無定向的擴散運動。大分子物質由於直徑較大,不易進入凝膠顆粒的微孔,而只能分佈顆粒之間,所以在洗脫時向下移動的速度較快。
小分子物質除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外,還可以進入凝膠顆粒的微孔中,即進入凝膠相內,在向下移動的過程中,從乙個凝膠內擴散到顆粒間隙後再進入另一凝膠顆粒,如此不斷地進入和擴散,小分子物質的下移速度落後於大分子物質,從而使樣品中分子大的先流出色譜柱,中等分子的後流喊祥信出,分子最小的最後流出,這種現象叫分子篩效應。具有多孔的凝膠就是分子篩。
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