1樓:液壓hoog賈超
樓主,是血清蛋白電泳醋酸纖維薄膜電波吧?
這是電泳分析中最常見的問題,多數是由於血清滴加不均勻或滴加過多,也有因薄膜質量不合要求所致。點樣這一步非常關鍵,一定要按操作步驟進行。首先選擇質勻、孔細、染料吸附少的薄膜充分浸透緩衝液至溼度均勻無干白點。
然後將濾紙吸去薄膜表面的多餘水份,使薄膜含水量飽和均勻,這樣才能防止薄膜表面液體含量不均,水份移動而引起標本移位。點樣前注意關閉門窗和風扇,因空氣流通快可使標本和水份蒸發而影響電泳圖形。點樣要力求做到均勻迅速,在實踐中把加樣器幹沾血清,改為沾取標本前先浸入蒸餾水中沾溼用吸水紙吸乾後再沾血清,這樣加樣器內均勻沾取血清的效果較幹沾為佳。
本人的建議是:在條件允許的前提下,同步跑兩個,做對照實驗!考慮點樣時可能影響結果的因素來進行,這是最笨拙的方法,但是這樣才能更好的瞭解問題的原因和各個因素的影響程度~!
參考文獻
王祖植.血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳實驗條件及影響因素探索.上海醫學檢驗雜誌,1987;2(3):140
延邊大學農學院 學生之拙見
參考資料
簡述血清蛋白電泳的基本操作過程有哪些
2樓:淵源
【 操作步驟】
1. 點樣 將醋酸纖維薄膜 (2.5cm×8cm) 一條,浸於巴比妥緩衝液,待完全浸透後,取出輕輕夾於濾紙中,吸去多餘的溶液,再於薄膜的無光澤面的一端 2.
0cm 處,用小玻片蘸取少許血清,垂直印於膜上,待血清滲入薄膜後,以無光澤面向下,兩端用數層浸溼的濾紙 ( 或紗布 ) 貼緊,加蓋,平衡 2 ~ 3min ,然後通電。
2. 通電 一般電壓用 110 ~ 140v ,電流約 0.4 ~ 0.6ma / cm ,時間 45 ~ 60min 。
3. 染色 關閉電源後立即將膜取出,放入染色液中浸染 2 ~ 3min ,然後移入漂洗液中漂洗數次,至蛋白條帶清晰,背景無色為止。
4. 定量 取試管 6 支,編號依次為 0 (空白)、 a 、 α1 、 α2 、 β 、 γ ,將電泳圖譜亦按 a 、 α1 、 α2 、 β 、 γ 蛋白區帶剪開,分別裝入相應號碼試管中。再在圖譜兩端無蛋白部位剪一條寬約 α1 帶的空白帶放入空白管中。
各管中加 0.4mol/l naoh 4ml ,振搖數次,使染料色澤浸出, 30min 後,在 620nm 波長下進行比色,以空白管校正零點,讀取清蛋白及 α1 、 α2 、 β 及 γ 球蛋白各管的吸光度。
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