1樓:匿名使用者
如果你的蛋白質可bai
能的du異源二聚體中兩個亞基大小有差異zhi(例dao如一個30kd,另一個50kd),那直接用sds-page就可
版以了.在sds和dtt/beta-me作用下權二聚體中的兩個亞基會完全分開,在泳道中按照分子量大小遷移,如能產生兩個大小不同含量相近的條帶則是異源二聚體,否則是同源二聚體.如果你可能的異源二聚體中的兩個亞基大小基本相同,則sds-page只能顯出一條帶,這時候你得藉助輔助手段(質譜鑑定,western等)鑑定,或者嘗試二維電泳,根據兩個亞基不同的電荷,分子量區分.
2樓:匿名使用者
你好,在電泳實驗中,分子質量大的蛋白質,移動的距離短,而分子質量較小的蛋白質,移動的距離長
電泳法分離混合蛋白質的基本原理是什麼?
3樓:我在等西瓜熟透
質的基本原理是根據蛋白質的電荷不同即酸鹼性質不同分離蛋白質混合物的方法。
電泳:在外電場的作用下,帶點顆粒將向著與其電性相反的電極移動,這種現象稱為電泳。電泳技術可用於氨基酸、肽、蛋白質和核苷酸等生物分子的分析分離和製備。
區帶電泳是由於在支援物上電泳蛋白質混合物被分離為若干區帶。
電泳前用緩衝液浸潤薄膜或濾紙等支援物或用緩衝液直接配置成凝膠,將待分離的蛋白質樣品加在它的一端或**,支援物的兩端與電極連線,通電電泳。電泳完畢,各個組分分佈在不同的區域,用顯色劑(蛋白質可用考馬斯亮藍或氨基黑等染色)顯色後可以顯示出各個組分。
氨基酸混合物特別是寡聚核苷酸混合物一次電泳往往不能完全分開。這種情況可以將第一次電泳分開的斑點通過支援介質間的接觸印跡轉移到第二個支援介質上,旋轉90°,進行第二次電泳。這種方法稱為雙向電泳。
聚丙烯醯胺凝膠電泳:以聚丙烯醯胺凝膠為支援物,一般製成凝膠柱或凝膠板,凝膠是由相連的兩部分組成(小的部分是濃縮膠,大的部分為分離膠),這兩部分凝膠的濃度、緩衝液組分和離子強度、ph以及電場強度都是不同的,即不連續性。電泳時樣品首先在不連續的兩相間積聚濃縮而成很薄的起始區帶,然後再進行電泳分離。
電泳有三種物理效應:1、樣品的濃度效應;2、凝膠對被分離分子的篩選效應;3、一般電泳分離的電荷效應。
毛細管電泳:高效毛細管電泳、毛細管區帶電泳、自由溶液毛細管電泳、毛細管電泳,可分離氨基酸、肽、蛋白質、dn**段和核酸以及多種小分子,也可用於手性化合物的分離。
等點聚焦(ief)分離蛋白質混合物是在具有ph梯度的介質(如濃蔗糖溶液)中進行。在外電場作用下各種蛋白質將移向並聚焦在等於其等電點的梯度處,並形成一個很窄的區帶。
ph梯度製作一般利用兩性電解質,它是脂肪族多胺和多羧類的同系物,它們具有相近但不相同的解離常數和等電點。在外電場作用下,自然形成ph梯度。
層析聚焦:根據蛋白質的等電點差異分離蛋白質混合物的柱層析方法。
4樓:timehappy老崔
1、電泳:在外電場的作用下,帶點顆粒將向著與其電性相反的電極移動,這種現象稱為電泳。電泳技術可用於氨基酸、肽、蛋白質和核苷酸等生物分子的分析分離和製備。
區帶電泳是由於在支援物上電泳蛋白質混合物被分離為若干區帶。
電泳前用緩衝液浸潤薄膜或濾紙等支援物或用緩衝液直接配置成凝膠,將待分離的蛋白質樣品加在它的一端或**,支援物的兩端與電極連線,通電電泳。電泳完畢,各個組分分佈在不同的區域,用顯色劑顯色後可以顯示出各個組分。
2、聚丙烯醯胺凝膠電泳:以聚丙烯醯胺凝膠為支援物,一般製成凝膠柱或凝膠板,凝膠是由相連的兩部分組成,這兩部分凝膠的濃度、緩衝液組分和離子強度、ph以及電場強度都是不同的,即不連續性。電泳時樣品首先在不連續的兩相間積聚濃縮而成很薄的起始區帶,然後再進行電泳分離。
電泳有三種物理效應:1、樣品的濃度效應;2、凝膠對被分離分子的篩選效應;3、一般電泳分離的電荷效應。
3、毛細管電泳:高效毛細管電泳、毛細管區帶電泳、自由溶液毛細管電泳、毛細管電泳,可分離氨基酸、肽、蛋白質、dn**段和核酸以及多種小分子,也可用於手性化合物的分離。
毛細管減少了由於熱效應產生的許多問題,可以提高熱散失,有助於消除由於熱引起的擴散增加而造成的對流和區帶變寬,因此管中不需要加入穩定介質即可進行自由流動電泳。
4、等點聚焦分離蛋白質混合物是在具有ph梯度的介質中進行。在外電場作用下各種蛋白質將移向並聚焦在等於其等電點的梯度處,並形成一個很窄的區帶。
5、層析聚焦:根據蛋白質的等電點差異分離蛋白質混合物的柱層析方法。
原理:當用特種緩衝液滴洗填充在柱中的特種多緩衝交換劑時,就會在層析柱中自上而下自動的建立起連續的ph梯度;同時加在柱上端的蛋白質樣品也隨多緩衝液的按各自的等電點聚焦在相應的ph區段。並在過程中隨ph梯度下移,蛋白質混合物的各組分先後從柱中出,達到分離純化的目的。
怎麼看蛋白質電泳分析結果圖,以及它的原理是什麼
5樓:雯王
雙向電泳就是等電聚焦電泳和sds-page的組合。
1.先進行等電聚焦電泳(按照蛋白等電點pi分離):在膠中加入雙性電解質溶液,加上電場後建立穩定ph梯度,蛋白質溶液加入後建立電場,蛋白以不同pi分離開來。
2.然後再進行sds-page(按照分子大小):將上一步的膠加上橫向電場,同一pi中聚集的蛋白,由於分子量不同而分開。
經染色(一般是銀染)得到的電泳圖是個二維分佈的蛋白質圖。
二維電泳使用於蛋白組學研究,對大批量蛋白篩選鑑定中存在很大優勢,通過不同膠做對比,把不同處的膠割出來單獨鑑定。
採用電泳技術如何測定蛋白質分子量
6樓:張家琛
把電泳技術如來何測定自蛋白質分子量的原理說一下吧
蛋白質在普通聚丙烯醯胺凝膠中的電泳速度取決於蛋白質分子的大小、分子形狀和所帶電荷的多少。sds(十二烷基磺酸鈉)是一種去汙劑,可使蛋白質變性並解離成亞基。當蛋白質樣品中加入sds後,sds與蛋白質分子結合,使蛋白質分子帶上大量的強負電荷,並且使蛋白質分子的形狀都變成短棒狀,從而消除了蛋白質分子之間原有的帶電荷量和分子形狀的差異。
這樣電泳的速度只取決於蛋白質分子量的大小,蛋白質分子在電泳中的相對遷移率和分子質量的對數成直線關係。以標準蛋白質分子質量的對數和其相對遷移率作圖,得到標準曲線,根據所測樣品的相對遷移率,從標準曲線上便可查出其分子質量。
7樓:匿名使用者
對不起,無此網路資源。。。
8樓:南湖子弟
蛋白質分子量大的慢一些,分子量小的快一些
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