1樓:美和
蛋白質電泳前,需用樣品緩衝液處理,樣品緩
衝液中除sds外,還有還原劑β-巰基乙
專醇,它可將蛋白質
屬分子中的s-s(二硫鍵)還原。電泳樣品製備時加熱,就是為了加速這些組分與蛋白質的反應。
問一下你們試驗提取的是不是總蛋白?還是特定的一種蛋白?我想應該是提的總蛋白,那麼就應該做到:
儘量提取完全;應使所有蛋白全部處於溶解狀態;防止發生蛋白的降解、聚集、沉澱、變性。看看你的目的蛋白的特性,是親水性的還是疏水性的,再決定留上清還是沉澱,如你的樣品是蛋白質沉澱物,加入50--100ul的sds加樣緩衝液並在同樣加熱後在上樣
sds-page樣品上樣前為什麼要加熱
2樓:北京索萊寶科技****
蛋白質電泳前,需用樣品緩衝液處理,樣品緩衝液中除sds外,還有還原劑β-巰基乙醇,它可將蛋白質分子中的s-s(二硫鍵)還原.電泳樣品製備時加熱,就是為了加速這些組分與蛋白質的反應.
3樓:匿名使用者
你好, 作用原理:聚丙烯醯胺凝膠為網狀結構,具有分子篩效應。它有兩種形式:
非變性內聚丙烯醯胺凝膠電泳(容native-page)及sds-聚丙烯醯胺凝膠(sds-page);非變性聚丙烯醯胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質能夠保持完整狀態,並依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。
而sds-page僅根據蛋白質亞基分子量的不同就可以分開蛋白質。該技術最初由shapiro於2023年建立,他們發現在樣品介質和丙烯醯胺凝膠中加入離子去汙劑和強還原劑(sds即十二烷基硫酸鈉)後,蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決於亞基分子量的大小(可以忽略電荷因素)。希望能幫到你。
蛋白質分子量測定過程中,樣品上樣前為什麼要進行沸水處理
4樓:匿名使用者
你是用什麼方法測定蛋白質分子量?
測定蛋白質分子量的方法有聚丙烯醯胺凝膠電泳,高效凝膠過濾色譜,電噴,霧離子化質譜法等,大部分都不需要煮沸!!
如果你只是簡單的使用sds聚丙烯醯胺凝膠電泳的方法,那麼煮沸的作用一個是使得蛋白質形成單亞基,另一個是與sds充分結合,形成性狀規則的長棒狀結構。
但是實際上聚丙烯醯胺凝膠電泳還有一種是非變性電泳,是不需要煮沸的!
請酌情考慮
5樓:***
變性,這樣才能與sds充分結合。否則測定不準。
蛋白質電泳,樣品上樣前為什麼要沸水浴
6樓:加
只有煮沸,才能消除蛋白質的立體二級結構,伸展為一維線性結構,所以一般來講二聚體都會解體,才能完全按照分子量跑電泳,加的蛋白marker才有指示分子量的意義!二硫蘇糖醇或巰基乙醇可以破壞二硫鍵,煮加速蛋白質的變性,sds的存在可以使每個氨基酸帶相同的電荷,使整個蛋白呈線性結構.100度煮10min後13000,離心5分鐘,取上清電泳,因為沉澱會導致拖尾.
也可以取上清到另一管,4度可以放一週備再次電泳.
sds-page樣品上樣前為什麼要加熱
7樓:北京索萊寶科技****
蛋白質電泳前,需用樣品緩衝液處理,樣品緩衝液中除sds外,還有還原劑β-巰基乙醇,它可將蛋白質分子中的s-s(二硫鍵)還原.電泳樣品製備時加熱,就是為了加速這些組分與蛋白質的反應.
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