topo載體為什麼不需要藍白斑篩選

2021-03-03 21:44:18 字數 332 閱讀 5639

1樓:當捻華褪去生澀

先連線t載體是為了提高轉化效率一般來說市面上**的t載體都進行了優化,容易連線片段(也就是效率較高),因此構建表達載體時有時會先連線t載體。同時t載體的測序引物比較明確(商業化的緣故),因此測序也方便一些。更重要的是,t載體往往設計了藍白斑篩選的功能,插入片段的載體會呈現白色,這樣也容易區分驗證,不用每個單菌落都拿去做colony pcr或提質粒酶切驗證。

當然也不是絕對的,我們實驗室就經常直接把片段酶切後連線表達載體,不經過t載體這一步,其實影響並不大。如果你的情況比較特殊(比如片段較大,或是對應的表達載體拷貝數較低等),可以考慮連線t載體,不然的話不是非常必要。

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