1樓:匿名使用者
對細菌細胞壁的詳細分析,為解釋革蘭氏染色的機制提供了較充分的基礎。目前多用物理機制來解釋革蘭氏染色現象。革蘭氏染色結果的差異主要基於細菌細胞壁的構造和化學組分不同。
通過初染和媒染,在細菌細胞膜或原生質體上染上了不溶於水的結晶紫與碘的大分子複合物。g+ 細菌由於細胞壁較厚、肽聚糖含量較高和交聯緊密,故用乙醇洗脫時,肽聚糖層網孔會因脫水而明顯收縮,再加上的g+ 細菌細胞壁基本上不含類脂,故乙醇處理不能在壁上溶出縫隙,因此,結晶紫與碘複合物仍牢牢阻留在其細胞壁內,使其呈現藍紫色。g- 細菌因其細胞壁薄、肽聚糖含量低和交聯鬆散,故遇乙醇後,肽聚糖層網孔不易收縮,加上它的類脂含量高,所以當乙醇將類脂溶解後,在細胞壁上就會出現較大的縫,這樣結晶紫與碘的複合物就極易被溶出細胞壁。
因此,通過乙醇脫色,細胞又呈現無色。這時,再經番紅等紅色染料復染,就使g- 細菌獲得了新的顏色——紅色,而g+ 細菌則仍呈藍紫色(實為紫中帶紅)。?
什麼是革蘭氏染色?有何意義?其染色機制如何?
2樓:消失的耐心
微生物學中最重要的染色方法。其機制直到在該方法發明100年後才得到了確切的證明。2023年,t.
beveridge等人用鉑代替革蘭氏染色原有媒染劑碘的作用,再用電鏡觀察到結晶紫與鉑複合物可被細胞壁阻留,從而證明了革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌主要由於其細胞壁化學成分的差異而引起了物理特性(脫色能力)的不同,正由於這一物理特性的不同才決定了最終染色反應的不同。
3樓:老劉123456活寶
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,2023年由丹麥醫師gram創立。未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色屬復染法,即將標本固定後,先用結晶紫染色1分鐘後水洗,然後加革蘭碘液媒染一分鐘後用酒精脫色,再用稀釋石炭酸復紅復染。染色後除可以看到細菌形態外,還可將細菌分為兩大類,即不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽性菌(g﹢)。被酒精脫色復染成紅色者為革蘭氏陰性菌(gˉ)。
革蘭氏染色原理尚不肯定,可能與細菌所帶核糖核酸、細菌壁結構通透性、等電點等因素有關。致病菌如金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌等屬革蘭氏染色陽性菌。百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等均屬革蘭氏陰性。
所以根據細菌的革蘭氏染色性質,可以縮小鑑定範圍,有利於進一步分離鑑定,以對疾病做出診斷。又由於各種抗生素的抗菌譜不同,革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。
革蘭氏染色的步驟和原理
4樓:江南蜜汁
原理:革蘭氏染色法可將所有的細菌區分為革蘭氏陽性菌(g+)和革蘭氏陰性菌(g-)兩大類,是細菌學上最常用的鑑別染色法。該染色法之所以能將細菌分為g+菌和g-菌,是因為一般認為革蘭氏染色是基於細菌細胞壁特殊化學組分進行染色的。
步驟:(一)塗片固定
在乾淨的載玻片**滴加一滴蒸餾水,用接種環進行無菌操作,挑取培養物少許,置載玻片的水滴中,與水混合做成菌懸液並塗布成直徑約1cm的薄層。
(二)染色
在固定過的塗片菌膜上滴加草酸銨結晶紫染液,染色液應完全覆蓋整個菌膜,染色1min。
(三)水洗
染色到一定的時間,拿住玻片使之成450角,用細小的水流把多餘的染料沖洗掉,被菌體吸附的染料則保留。
(四)媒染
加碘液覆蓋塗面染1 min。在媒染處理時,媒染劑與染料形成不溶性的化合物,可增加染料和細菌的親和力。
(五)水洗,用吸水紙吸去水分
用細小的水流緩慢沖洗塗片上的染色液,用吸水紙吸乾。
(六)脫色
加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色, 20 s~30 s後再進行水洗,吸去水分。
(七)復染
蕃紅染色液染色10 s後, 自來水沖洗。
(八)乾燥,鏡檢
染色的結果,革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色。
擴充套件資料
標本乾燥後即進行固定,固定的目的有三個:
(1)殺死微生物,固定細胞結構。
(2)保證菌體能更牢固的粘附在載玻片上,防止標本水洗時被水沖洗掉。
(3)改變染料對細胞的通透性,因為死的原生質比活的原生質易於染色。
5樓:鵝子野心
操作步驟:
1 .塗片
將培養的不同菌分別作塗片(注意塗片切不可過於濃厚),乾燥、固定。固定時通過火焰1一2 次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。
2 .染色
( 1 )初染加草酸鉸結晶紫一滴,約一分鐘,水洗。
( 2 )媒染滴加碘液衝去殘水,並覆蓋約一分鐘,水洗。
( 3 )脫色將載玻片上面的水甩淨,並襯以白背景,用95 %酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止,約20 一30 秒鐘,立即用水衝淨酒精。
( 4 )復染用番紅液染1 一2 分鐘,水洗。
( 5 )鏡檢乾燥後,置油鏡觀察.革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準,過於密集的細菌,常常呈假陽性。
( 6 ) 同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合製片,作革蘭氏染色對比。
革蘭氏染色的關鍵在於嚴格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結果,如陽性菌培養時間過長,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應。
原理:革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是1884 年由丹麥醫師gr 二創立的。
革蘭氏染色法(gram stain )不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類:染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用g+表示:染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用g 一表示。
細菌對於革蘭氏染色的不同反應,是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚糖形成的網狀結構組成的,在染色過程中,當用乙醇處理時,由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小,通透性降低,使結晶紫一碘複合物被保留在細胞內而不易脫色,因此,呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚糖含量低,而脂類物質含量高,當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁的通透性增加,使結晶紫一碘複合物易被乙醇抽出而脫色,然後又被染上了復染液(番紅)的顏色,因此呈現紅色。
革蘭氏染色需用四種不同的溶液:鹼性染料(basic dye )初染液;媒染劑(mordant ) ;脫色劑( decolorising agent )和復染液(counter stain )。鹼性染料初染液的作用象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫(crystal violet )。
媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘(iodine ) 是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同型別的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95 %的酒精(ethanol )。復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,從而將細胞區分成g +和g 一兩大類群,常用的復染液是番紅。
6樓:林與潘
一、 目的:在細胞發放之前,利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測,判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。
二、 原理:
7樓:張鈺濤
步驟:包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟。
原理:染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,2023年由丹麥醫師gram創立。未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色屬復染法。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(hans christian gram,2023年-2023年)於2023年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色法在微生物學中有何重要意義
8樓:喵喵喵啊
其重要的臨床意義在於:
1、鑑別細菌
2、選擇藥物
3、與致病性有關:革蘭氏陽性菌能產生外毒素,而內毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖,兩者的致病作用不同。
革蘭氏染色是用來鑑別細菌的一種方法:這種染色法利用細菌細胞壁上的生物化學性質不同,可將細菌分成兩類,即革蘭氏陽性與革蘭氏陰性。
這一染色方法由丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭於2023年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係,後推廣為鑑別細菌種類的重要特性之一。
擴充套件資料
革蘭氏染色法的原理:
通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小;
再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;
而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
9樓:廣州雙螺旋基因技術****
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(hans christian gram,2023年-2023年)於2023年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
其重要的意義在於:1.鑑別細菌,通過革蘭氏染色法可以將細菌分為兩大類2.選擇藥物
3.與致病性有關:革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素,兩者的致病作用不同。
什麼是微生物,什麼是微生物?微生物的作用是什麼
微 是極小的意思。微生物就是小到肉眼看不見,必須藉助於顯微鏡才能看見的生物。在空氣 陸地 河流和海洋裡都有微生物分佈,在人 畜和植物體內也有許多種微生物存在,有些是致病的,對人類有害,但是也有許多微生物對人類有益,如制酒用的酒麴就是用某些微生物做的,整個發酵工業都離不開微生物。存在於土壤中的微生物叫...
微生物學中較典型的革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌分別有哪些
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,1884年由丹麥醫師gram創立。細菌先經鹼性染料結晶染色,而經碘液媒染後,用酒精脫色,在一定條件下有的細菌不脫色,有的可被脫去,因此可把細菌分為兩大類,前者叫做革蘭氏陽性菌 g 後者為革蘭氏陰性菌 g 為方便觀察,脫色後再用一種紅色染料如鹼性蕃紅等進...
什麼是微生物?他們都有什麼作用,微生物的發現,有什麼意義和作用?
微 是極小的意思。微生物就是小到肉眼看不見,必須藉助於顯微鏡才能看見的生物。在空氣 陸地 河流和海洋裡都有微生物分佈,在人 畜和植物體內也有許多種微生物存在,有些是致病的,對人類有害,但是也有許多微生物對人類有益,如制酒用的酒麴就是用某些微生物做的,整個發酵工業都離不開微生物。存在於土壤中的微生物叫...