1樓：匿名使用者
為什麼非要先克隆到中間載體上測序
可以不同克隆到載體上。
dna測序過程，其實是pcr的過
內程，你只要有足夠容的模板用於pcr反應就行，不一定要克隆到載體上。
當然，大多數都是克隆到載體上，因為你需要將待測dna遞交給測序公司，位於載體上的dna可以儲存在細菌中，方便運輸，也方便測序公司進行擴增（培養菌，提質粒就行了），有時測序是需要重測的，一次不能測完，培養細菌擴增質粒是最簡單的方法。
為什麼要先構建克隆載體再用表達載體
2樓：匿名使用者
構建克隆載體是大量擴增dn**段，用以測序、酶切和改造等對dna實施的後續操作，構建表達載體是大量得到翻譯產物——蛋白質。
為什麼要先構建克隆載體，再用表達載體，我猜是因為：
①得到大量的dna，雖然pcr也可以，但pcr擴增有出錯率、但你每做一次常規的pcr，而且每次都要重新提dna和rna才行，而且，pcr反應的試劑盒又不便宜，用pcr來製備大量dna有點得不償失。儘管構建克隆載體也存在操作複雜（相對於pcr），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌，你就可以儲存了，你想什麼時候用，搖個菌，就可以製備到大量的dna。
②測序需要。你想轉表達，你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的，不要以為你設計了個特異性引物，然後跟你mark的長度就可以確定了，這也只是推測，在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許，要拿去測序，而一般送測的序列都是構建到載體上的序列，克隆載體上一般也都帶有測序引物，已確定這就是你要的那條序列。
你要寫**必須要給人真憑實據。
3樓：匿名使用者
先構建克隆載體再構建表達載體並不是一個必須的選擇，如果你的擴增pcr目的條帶很亮，而且單一性很好，我建議你可以直接克隆進入表達載體。
很多人選擇先構建克隆載體，是因為在擴增基因時目的條帶模糊，特異性不好，這樣將基因連線到克隆載體上就可以便於挑去單克隆進行測序，增加測序的準確度，從而確認自己克隆基因序列的正確性。單純的pcr產物往往是一些各種pcr片段的混合物，直接送過去測序，往往導致測序訊號峰很雜，有時候並不能測出想要的訊號序列。同時儲存的pcr片段比較容易降解，而構建好克隆載體後形成的質粒是很容易擴增和儲存的。
先構建克隆載體，一是為了便於測序，確認克隆序列正確，二是為了便於基因pcr片段的儲存。
4樓：匿名使用者
你最早的目的基因、質粒什麼的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先克隆，把它變多，再做實驗，去表達
5樓：匿名使用者
這樣才能選取合適的克隆載體，提高克隆效率，增大表達量，從而高效的得到所需的表達產物。
dna測序為什麼要克隆到載體上去
6樓：匿名使用者
可以不同克隆到載體上。
dna測序過程，其實是pcr的過程，你只要有足夠的模板用於pcr反應就行，不一定要克隆到載體上。
當然，大多數都是克隆到載體上，因為你需要將待測dna遞交給測序公司，位於載體上的dna可以儲存在細菌中，方便運輸，也方便測序公司進行擴增（培養菌，提質粒就行了），有時測序是需要重測的，一次不能測完，培養細菌擴增質粒是最簡單的方法。
關於原核表達基因測序問題
7樓：匿名使用者
其實簡單一點，可以直接克隆到表達載體上，送去測序確定之後再表達；我們版以前一直這麼做的；但是權有些情況下，比如表達載體不是誘導型的，或者表達的蛋白對大腸桿菌宿主菌毒性很大，影響菌的生長，導致菌生長困難、提質粒困難等等，就會先克隆到一個克隆載體上面，做測序確定；然後再克隆到表達載體上。
通常來說我不太喜歡做兩次克隆，總是酶切轉化篩選；我喜歡選控制比較嚴謹的可調控性原核表達載體，比如pet系列的多個載體，直接把目的基因克隆上去。
8樓：匿名使用者
如果該基因表達不影響表達載體的生長，是可以一步直接轉入表達載體的。但是表達載體不宜作為質粒長期儲存載體。
9樓：匿名使用者
每一步都是在確定你的基因是否正確。簡單地說，如果你最後沒有表達，問題出在哪一步就很難確定，只有在前面每一步都確定後，才不用最後走彎路。
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