1樓:
變性對pcr擴增來說bai相當重要,如du變性溫度低,zhi變性時間短,極有可dao能出現假專陰性;退火溫度過低,可致非屬特異性擴增而降低特異性擴增效率退火溫度過高影響引物與模板的結合而降低pcr擴增效率。有時還有必要用標準的溫度計,檢測一下擴增儀或水溶鍋內的變性、退火和延伸溫度,這也是pcr失敗的原因之一。
用來做pcr的標本有什麼要求?
2樓:匿名使用者
而mrna凍融極容易降解,況且由於環境和未知的原因(大多數溶液和物體上都有rnaase),所以,也是容易降解的一個原因
建議反轉錄成cdna凍存,相對來說更穩定一些
3樓:匿名使用者
建議如果要做pcr的話,逆轉錄一部分儲存!
做q-pcr,相同的標本為什麼每次做結果不同?
4樓:匿名使用者
注意操作的一致性以及穩定性,一般情況下不同批次是有批間差的,但是實驗流程相對比較成熟的實驗室,或者老師批間差不會很大,我們實驗室要求相同樣本批間差在0.2cycle以內。建議你多做幾組重複。
幾個標本之間做rt-pcr為什麼要把rn的濃度調成一致
5樓:南京金益柏生物科技****
在做抄qrt-pcr時,一定要有內參,即在pcr時,每個bai標本都要做對應的du內參,而且每次都是看家基因,一zhi般用
daobate-actin,有時也用gapdh。
內參的選擇:普通pcr內參的大小沒有多大要求,但real time一般選擇300bp以下。
它的作用在於你提取的rna逆轉錄成cdna時,加入的濃度可能會不一致,即使用分光廣度計測其濃度,也會有儀器誤差,跑出的條帶要進行灰度分析。用目的基因的積分光密度比上內參的光密度就是你這個基因實際表達的量。
希望對你有所幫助。
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