1樓：elisa愛逛街
在建立某一elisa測定中，應對包被抗原或抗體的濃度和酶標抗原或抗體的濃度予以選擇，以達到最合適的測定條件和節省測定費用。下面以間接法測抗體和夾心法測抗原為例，介紹最適工作濃度的選擇方法。
（一）間接法測抗體
1．酶標抗抗體工作濃度的選擇
（1）用100ng/ml人igg進行包被，洗滌。
（2）將酶標抗人igg用稀釋液作一系列稀釋後分別加入已包被的孔中，保溫、洗滌。
（3）加底物顯色。加酸終止反應後，讀取吸光度（a）。讀取a值在1.0時的酶標抗體稀釋度，作為酶標抗體的工作濃度。該酶標抗人igg的工作濃度應為1/1600。
2．棋盤滴定法選擇包被抗原工作濃度
（1）用包被液將抗原作一系列稀釋後進行包被，洗滌。
（2）將強陽性參考血清、弱陽性參考血清和陰性參考血清用稀釋液作1:100稀釋，加樣，保溫，洗滌。
（3）加按工作濃度稀釋的酶標抗人igg抗體，保溫，洗滌。
（4）加底物顯色。加酸終止反應後讀取a值。
（5）選擇強陽性參考血清的a值為0.8左右、陰性參考血清的a值小於0.1的包被抗的的稀釋度作為工作濃度。
（二）夾心法測抗原
在夾心法elisa法中可用棋盤滴定法同時選擇包被抗體和酶標抗體的工作濃度，舉例如下：
表 夾心elisa包被抗體和酶標抗體工作濃度的選擇
（1）抗體免疫球蛋白用包被緩衝液稀釋至蛋白濃度為10、1和0.1μg/ml，分別在elisa板上進行包被，每一濃度包括三個縱行，洗滌。
（2）在一個橫行各包被孔中加入強陽性抗原液，另一橫行加入弱陽性抗原液，第三橫行加入陰性對照液，保溫，洗滌。
（3）將酶標抗體用稀釋液稀釋成三個濃度，例如1:1000、1:5000和1:25000。分別加入每一包被濃度的一個縱行中，保溫，洗滌。
（4）加底物顯色。加酸終止反應後，讀取a值。
（5）以強陽性抗原的a值在0.8左右、陰性參考的a值小於0.1的條件作最適條件，據此選擇包被抗體和酶標抗體的工作濃度。
從表中可看出包被抗體濃度可選用1μg/ml，酶標抗體的稀釋度可選為1:5000。為了進一步節省試劑，可以此濃度為基點，縮小間距再做進一步的棋盤滴定。
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2樓：南京金益柏
這是我做雙抗體夾心elisa時設計的方案，你可以參考一下。
棋盤滴定法選擇抗體的最適工作濃度
a) 用包被緩衝液稀釋單克隆抗體，濃度分別為10ug/ml、5.0ug/ml、2.5ug/ml、1.
0ug/ml, 包被酶標板，每一濃度包被三個縱行，每孔100ul，每孔均作復孔。4 ℃過夜，pbst洗滌3次；
b) 5%脫脂奶粉封閉酶標板， 37℃孵育1h，洗滌3次；
c) 在橫行包被孔中依次加入空白對照，陰性對照血清，弱陽性抗原液及強陽性抗原液，各100ul,37℃孵育1h，洗滌3次；
d) 在每一包被濃度的一個縱行中分別加入按1:2000、1：5000、1：10000 稀釋的多抗， 37℃孵育1h，洗滌3次；
e) 在每一包被濃度的一個縱行中分別加入hrp標記igg抗體，稀釋度先按說明書上的，37℃孵育1h，洗滌3次；
f) 加tmb底物，37℃避光顯色10-15min，用2mol/l h2so4終止反應，酶標儀450nm讀取吸光度（od）值；
g) 測得的強陽性抗原液od值在1.0左右，陰性對照od值小於0.1的組合為較理想的組合。
可根據初步確定的濃度縮小間距,再做進一步棋盤滴定,尋找最佳包被條件。
抗體做稀釋時最好用同一個原始濃度做倍比稀釋，這樣可以儘量減少由於加樣槍造成的誤差及人為誤差。
剛剛學會用excel繪製elisa標準曲線，請問怎樣在excel中應用這個曲線得到的公式計算樣本的濃度呢，謝謝
3樓：終蕊勞子
可以利用excel散點圖新增趨勢線之後顯示公式實現。
首先假設**如下圖，a列為吸光度，b列為標準品的濃度。
第一步：選中**區域，插入建立以吸光度為橫座標（x軸）、濃度為縱座標（y軸）的散點圖。
4樓：匿名使用者
有了來公式以後,手動解一下方程源,得到一個公式bai: 濃度=fx(od) 然後在
duexcel裡面把od值帶入zhi,按照這個公式計算就行dao了. excel裡面編輯公式應該會吧? 否則去面壁30min再好好學學excel.
另外, 你可以用更專業的軟體來做計算,比如: softmax pro.
這個軟體可以提供更好的擬合方式 (4pl, 5pl), 而且可以全自動的計算,用起來非常方便.
網上可以找到免費的版本. good luck!
5樓：匿名使用者
你把od值作為橫座標,標準品的濃度作為縱座標,畫出趨勢線再算出公式（y關於x的一個方程式。）
最後將你的樣品的od值作為你的x值，代入公式，算出來的y值就是你的樣品濃度了。
6樓：鯉
有了公式以後,手動解一下方程,得到一個公式: 濃度=fx(od) 然後在excel裡面把od值帶入,按照這個公式計專算就行了屬. excel裡面編輯公式應該會吧?
否則去面壁30min再好好學學excel.
另外, 你可以用更專業的軟體來做計算,比如: softmax pro.
這個軟體可以提供更好的擬合方式 (4pl, 5pl), 而且可以全自動的計算,用起來非常方便.
網上可以找到免費的版本. good luck!
滴定法中的空白試驗是什麼意思
7樓：anyway中國
試驗中的bai“空白試驗”,係指在不du加供試品或zhi以等量溶劑替
dao代供試液的情況下回,按同法操作答
所得的結果;含量測定中的“並將滴定的結果用空白試驗校正”,係指按供試品所耗滴定液的量(ml)與空白試驗中所耗滴定液量(ml)之差進行計算。
8樓：安慶黃山人
對照組，作對比作用的
請問在hiv檢測中elisa是什麼檢測法，幾代試劑？
9樓：營梅佘詩
elisa就是bai我們常說的酶聯法du。
現在國內最差也是用
zhi3代試劑，有些地方會dao用4代試劑。版4代試劑（檢查抗原+抗體）——
視窗期為4周。因為抗原於3-4周達到複製的峰值，此時通過4代試劑檢查，如果感染了hiv，抗原/抗體至少有一個為陽性，如果都是陰就排除了。
3代試劑（只查抗體）——窗權口期為6周。
以上為理論分析+臨床經驗的結果，可以說是99.9%的準確度。
但是目前fda、cdc和試劑生產商統一達成的共識，也就是針對普通人，最保守的視窗期是3個月。無論什麼試劑，3個月都100%排除。
10樓：匿名使用者
elisa就是我們常說的copy酶聯法。
現在國內最差也是用3代試劑，有些地方
會用4代試劑。
4代試劑（檢查抗原+抗體）——視窗期為4周。因為抗原於3-4周達到複製的峰值，此時通過4代試劑檢查，如果感染了hiv，抗原/抗體至少有一個為陽性，如果都是陰就排除了。
3代試劑（只查抗體）——視窗期為6周。
以上為理論分析+臨床經驗的結果，可以說是99.9%的準確度。
但是目前fda、cdc和試劑生產商統一達成的共識，也就是針對普通人，最保守的視窗期是3個月。無論什麼試劑，3個月都100%排除。
11樓：洋這就是愛情
1 抗原或抗體能以物理性地吸附於固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間專
的疏水性部分相互吸附，並保持屬其免疫學活性；
2 抗原或抗體可通過共價鍵與酶連線形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；
3 酶結合物與相應抗原或抗體結合後，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。
12樓：周文大大好帥
誠至生物 6月20日
酶聯免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay，elisa)，是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。基本原理是：1）使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，並保持其免疫活性。
2）使抗原或抗體與某種酶連線成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由於酶的催化頻率很高，故可放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應，再用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其他物質分開，最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應底物後，底物被酶催化為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據反應後顏色的深淺進行定性或定量分析。
實驗流程
客戶提供
1.含待測樣品的標本（血清、血漿等）
2.elisa試劑盒
我們提供
1．基本實驗步驟
2．excel原始資料
3．標準曲線
實驗結果展示
1) elisa標準曲線
棋盤中的車相當於戰場上的什麼,棋盤裡車無輪馬無韁下一句是什麼
車可以橫衝直撞，但是不能越過去，個人覺得相當於戰場上的裝甲車一樣 棋盤裡車無輪馬無韁 下一句是什麼 唐伯虎 周星馳 曰 圖畫裡龍不吟虎不嘯小小書童可笑可笑棋盤裡車無輪馬無韁叫聲將軍提防提防 鶯鶯夜夜翠翠紅紅處處融融洽洽 雨雨風風花花葉葉年年暮暮朝朝 這個是周星池 的那個 唐伯虎點球香 裡的 下句是 ...
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