如何預防PCR實驗室汙染,PCR實驗室汙染了怎麼處理?

2021-07-27 22:11:07 字數 2376 閱讀 8921

1樓:匿名使用者

加溶液2後不要劇烈搖晃,溶液2處理時間不能太久,一般顛倒6-8次即加溶液3中和,這都是為了避免鹼裂解基因組;

加溶液3後要混合充分,離心後取上清小心不要吸到白色沉澱,那裡有組蛋白包著的基因組dna。

2樓:廣州雙螺旋基因技術****

進行分子檢測操作時,操作人員應該嚴格遵守一些操作規程,最大程度地降低可能出現的pcr汙染或杜絕汙染的出現。

1)實驗分割槽:實驗操作最好在三個不同的區域內進行,pcr的前處理和後處理要在不同的隔離區內進行:

各工作區要有一定的隔離,操作器材專用,要有一定的方向性。如:試劑準備

→標準制備→pcr擴增區及分析區。

切記:任何一間的產物及器材不要拿到其他兩個工作區。

2)分裝試劑:可把試劑反應液先分裝成20ul 的小管(pcr管,一次分裝不宜過多,以一週用完為宜),嚴格-20℃儲存;用時把分裝好的小管拿出加入模板即可。pcr擴增所需要的試劑均應在生物安全櫃、裝有紫外燈的超淨工作臺或負壓工作臺配製和分裝。

所有的加樣器和吸頭需固定放於其中,不能用來吸取擴增後的dna和其他**的dna。

3)嚴格取樣。取樣需要按照取樣規程來,做到專物專用(如取樣袋、剪刀等),禁止一物用在多個樣品上。

4)清潔實驗環境,減少陽性殘留。每次使用完的檯面、超淨臺或者生物安全櫃都需及時清理,酒精擦拭、紫外照射。有條件的話,實驗區要保持通風換氣。

5. 擴增產物處理。分子檢測的環境汙染大部分都是擴增產物的氣溶膠汙染;對於擴增產物要做到:1)儘量不開蓋;2)及時處理,丟棄時需放入密封袋中密封好再處理。

6. 實驗工具的定期清潔。實驗服、移液槍等都需定期清洗。

7. 勤換手套。樣品前處理完後,需換新的手套進行配液操作。

8. 嚴格按照說明書中的注意事項進行操作。

9. 注意通風換氣。每次實驗都要保證排氣扇或風扇的執行。

pcr實驗室汙染了怎麼處理?

3樓:北京索萊寶科技****

出現汙染後,我們首先考慮可能是試劑的汙染,更換新批號的hbv試劑重新檢測後,結果仍為全部標本陽性。

將hbv標本拿到其他正規的pcr實驗室檢測,結果標本中陰、陽性結果都有,陰性對照是陰性,陽性對照是陽性,說明標本沒有被汙染將兩種批號的hbv試劑拿到其他正規的pcr實驗室檢測,也顯示試劑沒有問題。

我實驗室用消毒液擦拭工作臺面後,開啟所有的紫外燈照射一天,將所使用微量進樣器、離心管、槍頭、手套、記號筆、記錄本等都更換掉,再將hbv標本進行檢測,結果全部標本仍然為陽性。

用消毒液擦拭工作臺面後,開啟所有的紫外燈照射一天,將hbv標本重新檢測,同時設定了兩個陰性對照(a和b),a 陰性對照為將試劑的反應管從試劑盒中拿,開啟反應管的蓋子,在空氣中暴露10 min,蓋上蓋子,上機檢測;b陰性對照為將試劑的反應管從試劑盒中拿,不開蓋子,直接上機檢測。結果是全部標本和a陰性對照為陽性,而b陰性對照為陰性。

至此,雖然還查詢不到汙染源是什麼,但有一點可以肯定,pcr實驗室汙染是氣溶膠擴散而引起的後來經過調查,發現汙染是由於本室工一位工作人員在打掃實驗室衛生時,用擴增區的掃笤和拖把打掃了標本製備區的衛生引起。

在確定了汙染的原因後,我們就開始著手排除汙染,每天都開啟整個pcr 實驗室的門窗和排氣扇,讓整個實驗室通風,用消毒液擦拭整個pcr實驗室,開啟所有的紫外燈照射。

每隔3 d按3.5步驟檢測一次,一直這樣處理了一個月,a陰性對照才轉為陰性。連續檢測三次a和b陰性對照,每次結果都均為陰性,才確定pcr實驗室恢復正常。

通常我們對pcr實驗室汙染的預防是採取隔離不同操作區、分裝試劑、改進實驗操作等規則,對汙染的處理是用稀鹽酸擦拭或浸泡;紫外線照射法等 ]。而對於實驗室的通風方面沒有給予足夠的重視,為了防止實驗區間之間的相互汙染,各個實驗區間都是儘可能的密閉,從而使得實驗室出現pcr產物殘留汙染的機率增大。從本次pcr實驗室汙染排除的過程來看.我覺得汙染得以排除的一個關鍵是通風。

適當的給予實驗室通風,可起到空氣稀釋的作用,有利於pcr產物殘留量的減少,加快實驗室汙染的排除。

4樓:廣州雙螺旋基因技術****

a. 實驗室進行通風處理,至少2 周的時間;

通風可加速擴增產物的消散的速度

b. 使用清水對實驗檯面、實驗室進行清洗;

dna不溶於酒精,使用清水多次擦拭後可消除附在實驗檯面等的核酸dna;

c. 使用紫外燈進**間的照射;

紫外線及產生的臭氧都有破壞dna結構的作用d. 之前使用的滅菌鍋使用清水清洗多次,不要和耗材等在一起滅菌;

e. 可用1mol/l 的鹽酸對可疑器具或者實驗檯面進行浸泡或擦拭。

鹽酸可使dna脫嘌呤,破壞dna的結構。

f. 若有條件,選擇一個新的實驗環境進行檢測實驗最好。

5樓:南京金益柏生物科技****

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