1樓：倫樂成
模板的用處就不說了吧
引物：引物首先會與模板配對，然後在酶的催化下從5『到3』延長dntp：合成dna當然得有原料，這原料就是4中鹼基，dntp就是4種鹼基
mg2+：增加特異性
酶及buffer：催化反應
pcr反應程式：變性，退火，延伸。一般來說，94度變性；退火溫度依你的引物而定，延伸時間依你使用的酶及片段大小而定。
以extaq為例，按經驗來看，退火溫度初次設定在引物理論退火溫度再低4度左右，延伸溫度為72度，延伸時間按60s/kb來定。
當你擴不出來的時候，可以把退火溫度按4度一個梯度進行pcr。
引物首先按加水量加水，再稀釋10倍，在20ul的反應體系中，正向反向引物上樣量一致，一般為0.2-0.4ul。
模板如果用的cdna，就加1ul，如果以質粒，則首先稀釋50倍再加1ul。2mm母液的dntp加2ul，exbuffer加2ul，extaq加0.1ul，其餘用ddh2o補齊至20ul。
2樓：匿名使用者
做25ul體系，18.3uldh2o，2.5ulbuffer，2ul dntp，1ul 所擴增樣品，0.
5ul上游引物，0.5ul下游引物，0.2ultaq酶。
buffer為緩衝液，dntp為pcr擴增提供各種單個的鹼基，上下游引物可以特異的結合在所擴增片段的兩端，酶估計你就瞭解了。希望能幫到你。
pcr反應體系包括哪幾個組分
3樓：娛樂這個feel倍爽兒
pcr就是聚合酶鏈式反應。再外界情況下完成對核算片段的迅速合成。
主要成分：有兩端引物，taq dna聚合酶 模板dna 合成dna的核苷酸。
主要程式：1。模板dna的變性，兩條鏈解開。
2。引物模板退火，二者鹼基配對
3。dna聚合酶以四種核甘酸為底物，在引物引導下合成和模板互補的dna新鏈。
4。重複此過程。
pcr的基本原理是什麼？其基本流程如何？
4樓：靠名真tm難起
一、基本原理：pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。
雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在dna聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。
在實驗中發現，dna在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制dna的變性和復性，加入設計引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
二、pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：
1、模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。
2、模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合。
3、引物的延伸：dna模板--引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
5樓：倚樓丶丶聽風雨
pcr的一般過程是什麼
6樓：匿名使用者
pcr是在試管中進行的dna複製反應，基本原理是依據細胞內dna半保留複製的機理，以及體外dna分子於不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉變的性質，人為地控制體外合成系統的溫度，以促使雙鏈dna變成單鏈，單鏈dna與人工合成的引物退火，然後耐熱dna聚合酶以dntp為原料使引物沿著單鏈模板延伸為雙鏈dna。pcr全過程每一步的轉換是通過溫度的改變來控制的。需要重複進行dna模板解鏈、引物與模板dna結合、dna聚合酶催化新生dna的合成，即高溫變性、低溫退火、中溫延伸3個步驟構成pcr反應的一個迴圈，此迴圈的反覆進行，就可使目的dna得以迅速擴增。
dna模板變性：模板雙鏈dna?單鏈dna，94℃。
退火：引物＋單鏈dna?雜交鏈，引物的tm值。
引物的延伸：溫度至70℃左右，taqdna聚合酶以4種dntp為原料，以目的dna為模板，催化以引物3』末端為起點的5』→3』dna鏈延伸反應，形成新生dna鏈。新合成的引物延伸鏈經過變性後又可作為下一輪迴圈反應的模板pcr，就是如此反覆迴圈，使目的dna得到高效快速擴增。
7樓：匿名使用者
基本原理：在模板、引物、4種dntp和賴熱dna聚合酶存在的條件下，特異擴增位於兩段已知序列之間的dna區段的酶促合成反應。基本步驟：
變性：加熱使雙鏈dna變為單鏈； 退火：降溫使引物和互補模板在區域性形成雜交鏈 ；延伸：
耐熱dna聚合酶按5』→3』方向催化以引物為起始點的延伸反應。生物一一四。
簡述pcr的具體過程
簡述pcr技術操作步驟
簡述聚合酶鏈式反應（pcr）的原理和具體過程。
8樓：匿名使用者
9樓：匿名使用者
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