1樓：可愛的笑道
幾乎所有植物中都存在澱粉酶，尤其是萌發的禾穀類種子，澱粉酶活性最強。主要是α-澱粉酶和β-澱粉酶。種子萌發時，澱粉酶活性隨萌發時間迅速增加，將澱粉分解成小分子糖類，供幼苗生長。
α-澱粉酶隨機水解澱粉的α-1，4-糖苷鍵，作為澱粉分解的起始酶而起主要作用；其水解產物為麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原性糖；β-澱粉酶水解非還原端的第二個α-1，4-糖苷鍵，水解產物為麥芽糖，並能使一部分糊精糖化。本實驗以萌發種子為材料，測定其中α-澱粉酶和β-澱粉酶活性的差異。
【原理】
兩種澱粉酶具有不同理化特性，α-澱粉酶不耐酸，在ph3?6以下迅速鈍化；β-澱粉酶不耐熱，在70℃下15min則被鈍化。據此，在測定時鈍化其中之一，就可以測定出另一種酶的活力，本實驗採用加熱鈍化β-澱粉酶測出α-澱粉酶活力，再與非鈍化條件下測得的總澱粉酶活力比較，求出β-澱粉酶活力。
澱粉的水解產物麥芽糖及其他還原性糖能與3，5-二硝基水楊酸試劑反應，使其還原生成紅色3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定範圍內，其顏色深淺與澱粉酶水解產物的濃度成正比，可用麥芽糖(或葡萄糖)濃度表示，用比色法測定澱粉生成的還原糖的量，以單位重量樣品在一定時間內生成的麥芽糖的量表示酶活力。
【儀器與用具】
分光光度計；離心機；恆溫水浴器；研缽；具塞刻度試管25ml 13支，刻度吸管1ml、2ml、5ml各1支；容量瓶50ml 2支。
【試劑】
麥芽糖標準液(1mg／ml)：稱取100mg麥芽糖，用蒸餾水溶解並定容至100ml。
dns試劑(3，5-二硝基水楊酸)：精確稱取3，5-二硝基水楊酸1g，溶於20ml 12mol／l naoh溶液中，加入50ml蒸餾水，再加入30g酒石酸鉀鈉，待溶解後用蒸餾水定容至100ml。蓋緊瓶塞，勿使co2進入。
若溶液混濁，可過濾後使用。
0?1mol／l ph5?6的檸檬酸緩衝液：
a液(0?1mol／l檸檬酸)：稱取分析純檸檬酸21?
01g，用蒸餾水溶解並定容至1l；b液（0?1mol／l檸檬酸鈉）：稱取檸檬酸鈉29?
41g用蒸餾水溶解並定容至1l；取a液55ml與b液145ml混勻，即為0?1mol／l ph5?6的檸檬酸緩衝液。
1％澱粉溶液：稱取1g澱粉溶於100ml 0?1mol／l ph5?6的檸檬酸緩衝液中。
【方法】
1.酶液提取稱取25℃下萌發3～4天的小麥種子1?0g(芽長1?
0～1?5cm)，置研缽中，加少量石英砂和2ml蒸餾水，研磨成勻漿後轉入離心管中，用7ml蒸餾水分次將殘渣洗入離心管，提取液在室溫下放置提取15～20min，每隔數分鐘攪動1次，使其充分提取。然後在3000r／min轉速下離心10min，將上清液倒入50ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即為澱粉酶原液。
吸取上述澱粉酶原液5ml，放入50ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度搖勻，即為澱粉酶稀釋液。
2?麥芽糖標準曲線製作取7支幹淨的具塞刻度試管，編號，按表18-1加入試劑：
表18-1製作麥芽糖標準曲線配方表
試劑管號1234567麥芽糖標準液（ml)00.20.40.
81.21.62.
0蒸餾水（ml)2.01.81.
61.20.80.
40麥芽糖含量（mg)00.20.40.
81.21.62.
03,5-二硝基水楊酸（ml)2222222搖勻，置沸水浴中煮沸5min。取出後流水冷卻，加蒸餾水定容至20ml。以1號管作為空白調零點，在540nm波長下比色測定。
以麥芽糖含量為橫座標，吸光度值為縱座標，繪製標準曲線。
3?酶活力的測定取6支幹淨的具塞刻度試管，編號，按表18-2進行操作。
表18-2酶活力的測定配方表
操作專案管號ⅰ-1ⅰ-2ⅰ-3ⅱ-1ⅱ-2ⅱ-3澱粉酶原液（ml)1.01.01.
0000鈍化β-澱粉酶置70℃水浴中15min,取出後在流水中冷卻澱粉酶稀釋液（ml)000111dns試劑（ml)2.0002.000預保溫40℃恆溫水浴中保溫10min1%澱粉溶液（ml)(40℃)1.
01.01.01.
01.01.0保溫40℃恆溫水浴中準確保溫5mindns試劑（ml)02.
02.002.02.
0搖勻，置沸水浴中5min，取出後冷卻，加蒸餾水至20ml，搖勻，在540nm波長下比色，記錄測定結果。
4?結果計算 用ⅰ-2、ⅰ-3吸光度平均值與ⅰ-1吸光度值之差，在標準曲線上查出相應的麥芽糖含量(mg)，再按下式計算α-澱粉酶的活力(aα)，澱粉酶活性以每克鮮重所含麥芽糖毫克數(mg／g·min)表示： aα＝cαvtfw×t×v1（18-1）
ⅱ-2、ⅱ-3吸光度平均值與ⅱ-1吸光度值之差，在標準曲線上查出相應的麥芽糖含量(mg)，按式18-1計算(α＋β)-澱粉酶的活性at?at＝ct×vtfw×t×v1
式中a:澱粉酶活性，aα為α-澱粉酶的活性，at為澱粉酶總活性，主要是α、β-澱粉酶的活性；
cα:α-澱粉酶水解澱粉生成的麥芽糖量(查標準曲線求值，以下同)； ct:(α＋β)澱粉酶共同水解澱粉生成的麥芽糖量；
v1:顯色所用酶液體積(ml)；
t:酶作用時間(min)；
vt:樣品稀釋液總體積(α-澱粉酶為50ml，α＋β澱粉酶為500ml)；
fw:樣品鮮重(g)。
2009江蘇南通生物第二次模擬測試第三十三題第一問。（本質是化學濃度計算）
2樓：匿名使用者
2---1.8
3--1.4
4--1.0
5--0.6
6--0.4
7--0.0
要遵守單一變數原則...而且要與下面麥芽糖含量一致....
不明白再來問我
（2zz9?南通二模）萌發的禾穀類種子中澱粉酶活性較強，主要有α-澱粉酶和β-澱粉酶．α-澱粉酶不耐酸、較
3樓：軍
（1）**實驗要控制變數，根據表中資料可知試管中加入麥芽糖標準溶液和蒸餾水的總量為2ml，因此2～7試管中加入蒸餾水的量分別是1.8ml、1.4ml、1.
0ml、0.6ml、0.4ml、0ml．
（2）萌發的禾穀類種子含有α-澱粉酶和β-澱粉酶．α-澱粉酶不耐酸、較耐熱，在p地為3.6以下迅速失活；而β-澱粉酶不耐熱，在70℃19m一n後失活．本實驗的目的是測定小麥種子中α-澱粉酶催化效率，因此要根據β-澱粉酶不耐熱，在70℃19m一n後失活的特性排除β-澱粉酶的干擾．所以步驟g要將裝有澱粉酶溶液的試管置於70℃水浴中19m一n，取出後迅速冷卻．
（3）澱粉酶能將澱粉水解成還原糖，而還原糖可以用斐林試劑進行鑑定，因此步驟五的實驗操作是分別取a、b試管中反應溶液各2ml，向其中分別加入2ml斐林試劑，再將試管置於60℃水浴中加熱 2m一n後，觀察顏色變化．
（4）澱粉溶液中可能含有少量的還原糖，因此實驗中b試管得作用是檢測實驗使用的澱粉溶液中是否存在還原糖．
故答案為：
（1）1.8、1.4、1.0、0.6、0.4、0
（2）將裝有澱粉酶溶液的試管置於70℃水浴中19m一n，取出後迅速冷卻
（3）分別取a、b試管中反應溶液各2ml，一段時間後，再向其中加入2ml斐林試劑、60℃水浴加熱2m一n後，觀察顏色變化
（4）檢測實驗使用的澱粉溶液中是否存在還原糖
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