1樓：匿名使用者
沒有必要，最多一個樣品一次反應用兩個重複的，以防有明顯的操作失誤。如果兩個孔的資料很接近，就取平均值作為一個值來看待。如果2者差別很大，說明有操作失誤，這個樣本的結果就不能要，需要重做。
熒光定量pcrct值每次重複相差多少
2樓：
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下：
對照組基因a的ct值為20， 內參（比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。 首先算加樣量：
delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說。。
如何避免熒光定量pcr檢測技術的實驗誤差
3樓：北京索萊寶科技****
避免熒光定量pcr檢測技術的實驗誤差的方法如下：
樣品的處理及選取
處理樣品時，必須確保樣品都得到了充分的處理。選取實驗樣品時，要保證選取的組織儘可能的純，不要汙染其他組織，樣品選好後，即可放入液氮或超低溫冰箱儲存。
核酸提取
加入液氮研磨要徹底，蛋白、多糖、多酚類物質要去除乾淨，確保得到高質量的核酸，分光光度計檢測核酸質量，rna od260/280=2.0左右，dna od260/280=1.8左右，最好再做電泳檢測；同一樣品要提取2到3個rna，所剩餘的樣品不要丟棄，繼續低溫儲存。
得到的rna立即反轉錄為cdna，rna樣品最好不要存放。
對於精度要求較高的定量pcr，最好先在樣品的所有組織型別內做內參基因的穩定性分析，找到表達恆定基因作為內參。
做定量pcr時，先把除模板外的所有試劑預混，然後分裝到pcr管中，分裝時儘量採用排槍，加樣時儘量採用排槍。
體系中最好參入rox參比熒光，消除光程差和加樣的偏差。
重複操作
讓重複操作最大的修正偏差。最有意義的重複是提取樣品rna時就重複，同一個樣品，分別提取3份rna，3份rna都做反轉錄，所得的3份cdna都做定量pcr檢測，這樣的重複之所以最有意義是因為我們把rna提取、反轉錄、上機檢測三步做了重複，這樣得出的平均值要比只在上機檢測時對同一cdna樣品做三個重複要有意義的多。
同一個cdna樣品做三個重複定量檢測求平均值主要是消除加樣時的誤差，排槍加樣時，誤差很小，加樣時的誤差可以通過設幾個重複檢測出來。
4樓：匿名使用者
誤差是難以避免的 只要操作的時候小心。相關係數要想接近1，最好去掉一個不是很準的點，或者可以做三組標準品的平行，最好是事先把所有東西都混成一個mix，然後三個孔一起加。
熒光定量pcr檢測需要多次嗎
5樓：匿名使用者
一次就可以，每個樣品要有至少三個重複。如果你認為資料不合理，可以多做幾次，最好重新取樣品來做。
我要用CT法做熒光定量PCR，請問需要做標準曲線嗎？關於濃度
最好是做標準曲線，要看看擴增效率的。調cdna就還了 不需要做標準曲線吧?我沒有調rna濃度，你調了也作用不大，畢竟你做反轉錄是mrna的反轉錄，你如果調總rna的濃度也沒多大用啊。如果是mrna濃度調到一致還是可以的。請問做熒光定量pcr時每次都需要做標準曲線嗎？謝謝！絕對定量只要做一個就行。相對...
實時熒光定量PCR擴增actin溶解曲線怎麼兩個峰
兩個峰長什麼樣？是挨在一起的還是離的很遠的？縱座標最高峰是多少？是同一個峰出現一個小缺口的樣子嗎？如果可以請將原圖傳上 誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用 溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。擴增反應...
我的乙型肝炎病毒定量,實時熒光定量PCR,結果991E
樓主你好 bai 你的病毒數量略微偏高du 若肝功能正常zhi則不建議 dao使用抗病毒 回,效果不會好,而且答容易發生耐藥 不知兩對半結果如何?但可以大概判斷的是你現在處於免疫耐受狀態,即你自己的免疫力並未對乙肝病毒產生攻擊,因此肝功正常。所以建議使用免疫調節 激發和調動免疫功能,同時定期複查肝功...