1樓:北京索萊寶科技****
△△ct = △ct(試驗樣品) — △ct(基準樣品)△ct(試驗樣品) = ct(試驗樣品,目的基因) — ct(試驗樣品,內參基因)
△ct(基準樣品) = ct(基準樣品,目的基因) — ct(基準樣品,內參基因)
2 -△△ct =2 -(-1.2)= 2.30
用2-△△ct法處理熒光定量pcr資料時,sd值應該怎麼算 5
2樓:匿名使用者
因為基本每個樣本都是三個復孔,所以用目的基因ct平均減去內參的平均,再算其2-△△ct,excel即可。柱狀圖的error bar是你作圖的時候,軟體會自動給出,因為你每組會重複三次
3樓:匿名使用者
減去內參再用2-△△ct值來計算
請問:做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼? 20
4樓:禾鳥
△△ct是熒光定量計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx₀+lgn/lg(1+ex),其中,n為擴增反應的迴圈次數,x₀為初始模板量,ex為擴增效率,n為熒光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct(目的基因)-ct(內參基因);△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多,ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫座標代表起始拷貝數的對數,縱座標代ct值。因此,只要獲得未知樣品的ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
熒光定量pcr的原理:
熒光定量pcr技術:在pcr反應體系中加入熒光基團,通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程,然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中,對全程pcr擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時熒光定量常用的熒光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值:c代表cycle,t代表threshold,ct值的含義是每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
5樓:一生一個乖雨飛
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍:90%-110%
斜率範圍:-3.1和-3.59之間
例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方。
當然這計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時使用沒什麼問題,如果兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。
6樓:匿名使用者
ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍:90%-110%
斜率範圍:-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方,當然這中計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時隨便用用沒什麼問題,如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。
7樓:匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式,方便的話可以給我留一下你的郵箱
我想問一下熒光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量的問題
8樓:
做了一個實驗,內部參考電壓可以得到幾個ct值,會得到多個目標基因。在這種情況下,根據ct值的平均值,將得到的比率(相對量)。
實驗肯定不是唯一的一次,至少重複3次。這將是一個倍數的3個或更多,得到。 3個以上的值,你可以計算平均值和標準偏差的。
9樓:匿名使用者
三次獨立實驗,每次至少三個重複,統計結果自然就是那樣了。
10樓:塔渟盛淑賢
你一次實驗做的資料,內參可以得到幾個ct值,目的基因也會得到幾個。這樣的話,根據平均的ct值,就會得到一個倍數(相對量)。
實驗肯定不會只做一次吧,至少重複3次以上。這樣就會得到3個以上的倍數了。3個以上的數值就可以算均數和標準差了。
我想問一下熒光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量時結果的標準差是如何計算的
11樓:匿名使用者
這個很簡單啊。你做了一次實驗,得到的樣本做了一次pcr,得到了一次的相對定量(設對照組為1)。然後重新做實驗,再做pcr,又得到一組,這樣至少重複3次,就有3組相對定量了。計算標準差
對照組的標準差:取對照組的平均ct值設為1, 3次試驗的ct值根據2-△△ct計算相對量,可以算出對照組的標準差。
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