1樓:什麼困難
細胞內不同的細胞器結構和功能不同,密度也不同,可以用旋轉離心的方法利用不同的轉速將不同的細胞器沉澱,密度大的在下邊,密度小的在上邊,即差速離心法.
差速離心法和密度梯度離心法區別
差速離心法是根據顆粒大小和密度的不同存在的沉降速度差別,分級增加離心力,從試樣中依次分離出不同組分的方法。
差速離心法是交替使用低速和高速離心,用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法。此法適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分的分離。
密度梯度離心法是在密度梯度介質中進行的依密度而分離的離心法。各組分會依其密度分佈在與其自身密度相同的液層中。密度梯度可以離心前預先製備或在離心中自然形成。
可用於分析型或製備型的離心分離。
密度梯度離心中單一樣品組份的分離是藉助於混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達到的 差速離心法是用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離。
密度梯度離心只用一個離心轉速,而差速離心用兩個甚至更多的轉速。
:密度梯度離心的物質是密度有一定差異的,而差速離心是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分。
兩者其實不用過於糾結,只需記住分離細胞器用差速離心法就行了,高考不會考兩者具體的區別的
2樓:
它是用來研究dna複製的時候用的,但是分離細胞器用的是差速離心法。至於為什麼,我沒試過
關於離心細胞器的問題
3樓:
根據不同細胞器的密度不同。
細胞離心技術
離心是研究如細胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體,以及各種大分子基本手段。一般認為,轉速為10~25kr/min的離心機稱為高速離心機;轉速超過25kr/min,離心力大於89kg者稱為超速離心機。目前超速離心機的最高轉速可達100kr/min,離心力超過500kg。
(一)、差速離心(differential centrifugation)
在密度均一的介質中由低速到高速逐級離心,用於分離不同大小的細胞和細胞器。
在差速離心中細胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、最後為核蛋白體。
由於各種細胞器在大小和密度上相互重疊,而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉澱塊中,一般重複2~3次效果會好一些。
差速離心只用於分離大小懸殊的細胞,更多用於分離細胞器。通過差速離心可將細胞器初步分離,常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。
速度逐漸提高,樣品按大小先後沉澱
(二)、密度梯度離心(density gradient centrifugation)
用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度,將細胞混懸液或勻漿置於介質的頂部,通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種。密度梯度離心常用的介質為氯化銫,蔗糖和多聚蔗糖。
分離活細胞的介質要求:1)能產生密度梯度,且密度高時,粘度不高;2)ph中性或易調為中性;3)濃度大時滲透壓不大;4)對細胞無毒。
a等速度沉降,b等密度沉降
1、速度沉降
速度沉降(velocity sedimentation)主要用於分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器。這種降方法所採用的介質密度較低,介質的最大密度應小於被分離生物顆粒的最小密度。
生物顆粒(細胞或細器)在十分平緩的密度梯度介質中按各自的沉降係數以不同的速度沉降而達到分離。
2、等密度沉降
等密度沉降(isopy**ic sedimentation)適用於分離密度不等的顆粒。
細胞或細胞器在連續梯度的介質中經足夠大離心力和是夠長時間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質處,並停留在那裡達到平衡,從而將不同密度的細胞或細胞器分離。
等密度沉降通常在較高密度的介質中進行。介質的最高密度應大於被分離組分的最大密度,而且介質的梯度要求較高的陡度,不能太平緩。再者,這種方法所需要的力場通常比速率沉降法大10~100倍,故往往需要高速或超速離心,離心時間也較長。
大的離心力、長的離心時間都對細胞不利。大細胞比小細胞更易受高離心力的損傷,而且停留在等密度介質中的細胞比處在移動中的細胞受到更大的損傷。因此,這種方法適於分離細胞器,而不太適於分離和純化細胞。
差速離心法和密度梯度離心法的區別
4樓:甜小糖
區別一:定義不同
差速離心法:差速離心主要是採取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞器。起始的離心速度較低,讓較大的顆粒沉降到管底,小的顆粒仍然懸浮在上清液中。
收集沉澱,改用較高的離心速度離心懸浮液,將較小的顆粒沉降,以此類推,達到分離不同大小顆粒的目的。
密度梯度離心法:用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度,將細胞混懸液或勻漿置於介質的頂部,通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。
區別二:原理不同
差速離心法:物體圍繞中心軸旋轉時會受到離心力f的作用。當物體的質量為 m、體積為v、密度為d、旋轉半徑為r、角速度為(弧度數/秒)時,可得:
f=mω2r 或者 f=v.d.ω2r 。
密度梯度離心法:不同顆粒之間存在沉降係數差時,在一定離心力作用下,顆粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同區域上形成區帶的方法。
區別三:轉速不同
差速離心法:用多個離心轉速。
密度梯度離心法:只用一個離心轉速。
區別四:密度不同
差速離心法:是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分。
密度梯度離心:用此方法的物質密度有一定差異的。
5樓:從小就愛玩
差速離心法,這種離心方法只能將那些大小有顯著差異的組分分開!而密度梯度離心則是較為精細的分離手段,這種方法的關鍵是先在離心管中製備出蔗糖或氯化銫等介質的濃度梯度並將細胞勻漿裝在最上層,密度梯度的介質可以穩定沉澱成分,防止對流混合,在此條件下離心,細胞不同組分將以不同速率沉降並形成不同沉降帶。
6樓:yn桃李醉春風
一、密度梯度離心法和差速離心法的區別
1. 差速離心法是用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離,密度梯度離心中單一樣品組份的分離是藉助於混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達到的。
2. 差速離心用兩個甚至更多的轉速,而密度梯度離心只用一個離心轉速。
3. 差速離心是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大的組分,而密度梯度離心的物質是密度有一定差異的。
二、差速離心法
差速離心法是交替使用低速和高速離心,用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法。此法適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分的分離。
1. 沉降係數
使用離心法時,大分子沉降速度的量度,等於每單位離心場的速度。或 s=v/ω2r,s 是沉降係數, ω 是離心轉子的角速度(弧度 / 秒), r 是到旋轉中心的距離, v 是沉降速度。沉降係數以每單位重力的沉降時間表示,並且通常為 1 ~ 200×10-13 秒範圍, 10-13 這個因子叫做沉降單位 s ,即 1s=10-13 秒,如血紅蛋白的沉降係數約為 4×10 -13 秒或 4s 。
大多數蛋白質和核酸的沉降係數在 4s 和 40s 之間,核糖體及其亞基在 30s 和 80s 之間,多核糖體在 100s 以上。
2. 差速離心法的優缺點
差速離心法的優點是樣品的處理量較大,可用於大量樣品的初分離。其缺點是分離複雜樣品和要求分離純度較高時,離心次數多,操作繁雜。由於沉澱的多次清洗、溶解、再沉澱,容易引起中間損失,所以離心分辨力差。
實際分離時由於離心時的對流、擴散和收取沉澱時的汙染,對於一些沉降係數相差不大的組分無法進行完全的分離提純。產品的純度和**率都達不到上述理論值。因此差速離心法主要用於大量樣品的初步分離提純。
三、密度梯度離心法
密度梯度離心法又稱為區帶離心法,是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。
1. 分類
( 1 )差速區帶離心法:分離密度相差不大、重量和大小區分較大的樣品。 將樣品置於平緩的預先制好的密度梯度介質上,進行離心,較大的顆粒將比較小的顆粒更快地沉降。
通過梯度介質,形成幾個明顯的區帶(條帶)。這種方法有時間限制,在任一區帶到達管底之前必須停止離心。大小相同、密度不同的顆粒(如溶酶體、線粒體和過氧化物酶體)不能用本法分離。
( 2 )等密度區帶離心法:用於樣品顆粒的浮力密度差,密度差越大的樣品分離效果越好,與顆粒大小和形狀無關。離心管中預先放置好梯度介質,樣品加在梯度液麵上,或樣品預先與梯度介質溶液混合後裝入離心管,通過離心形成梯度。
離心時,樣品的不同顆粒向上浮起,一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上,形成幾條不同的區帶,這就是等密度離心法。離心所需時間以最小顆粒到達等密度點(即平衡點)的時間為基準,有時長達數日。
等密度區帶離心法所用的梯度介質通常為氯化銫 c s cl ,其密度可達 1.7 g/cm3 。此法可分離核酸、亞細胞器等,也可以分離複合蛋白質,但簡單蛋白質不適用。
2. 密度梯度離心法的優缺點
優點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應範圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性。
缺點是:①離心時間較長;②需要製備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。
7樓:匿名使用者
差速離心是每次用不同的轉速將混在一起但是比重不同的結構或物質分開(某速度離心一次分離出一個),比如細胞器的分離;
密度梯度離心一般是一次離心讓混合物中比重不同的分成不同的層。比如dna半保留複製的實驗證據就是用這個方法
8樓:華
區別在於差速利用速度不同,而密度利用比重。
差速離心是每次用不同的轉速將混在一起但是比重不同的結構或物質分開(某速度離心一次分離出一個),比如細胞器的分離;
密度梯度離心一般是一次離心讓混合物中比重不同的分成不同的層。
差速離心法和密度梯度離心法的區別
兩者都是依靠離心力對細胞勻漿懸浮扔中的顆粒進行分離的技術.差速離心是一種較為簡便的分離法,常用於細胞核和細胞器的分離.因為在密度均一的介質中 一 密度梯度離心法和差速離心法的區別 1.差速離心法是用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離,密度梯度離心中單一樣品組份的分離是藉助於混合樣品穿過密度...
下列哪一項不是種群的特徵A種群密度B出生率和死亡
種群基本特徵 種群的密度 最基本數量特徵 種群的出生率和死亡率 決定種群密度 種群的年齡組成 種群密度 種群的性別比例 影響種群密度 空間配置為水平結構屬於群落結構.故選 d.在種群的下列特徵中,對種群個體數量的變動起決定作用的是 a.種群密度b.年齡組成c.性別比例d.a 種群密度是種群數量最基本...