差速離心法和密度梯度離心法的區別

2021-03-14 10:43:24 字數 5633 閱讀 8845

1樓:匿名使用者

兩者都是依靠離心力對細胞勻漿懸浮扔中的顆粒進行分離的技術.差速離心是一種較為簡便的分離法,常用於細胞核和細胞器的分離.因為在密度均一的介質中

2樓:枚悌進悟

一、密度梯度離心法和差速離心法的區別

1.差速離心法是用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離,密度梯度離心中單一樣品組份的分離是藉助於混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達到的。

2.差速離心用兩個甚至更多的轉速,而密度梯度離心只用一個離心轉速。

3.差速離心是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大的組分,而密度梯度離心的物質是密度有一定差異的。

二、差速離心法

差速離心法是交替使用低速和高速離心,用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法。此法適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分的分離。

1.沉降係數

使用離心法時,大分子沉降速度的量度,等於每單位離心場的速度。或

s=v/ω2r,s

是沉降係數,

ω是離心轉子的角速度(弧度

/秒),

r是到旋轉中心的距離,

v是沉降速度。沉降係數以每單位重力的沉降時間表示,並且通常為1~

200×10-13

秒範圍,

10-13

這個因子叫做沉降單位s,即

1s=10-13 秒,如血紅蛋白的沉降係數約為

4×10

-13秒或

4s。大多數蛋白質和核酸的沉降係數在4s和

40s之間,核糖體及其亞基在

30s和

80s之間,多核糖體在

100s

以上。2.

差速離心法的優缺點

差速離心法的優點是樣品的處理量較大,可用於大量樣品的初分離。其缺點是分離複雜樣品和要求分離純度較高時,離心次數多,操作繁雜。由於沉澱的多次清洗、溶解、再沉澱,容易引起中間損失,所以離心分辨力差。

實際分離時由於離心時的對流、擴散和收取沉澱時的汙染,對於一些沉降係數相差不大的組分無法進行完全的分離提純。產品的純度和**率都達不到上述理論值。因此差速離心法主要用於大量樣品的初步分離提純。

三、密度梯度離心法

密度梯度離心法又稱為區帶離心法,是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。

1.分類(1

)差速區帶離心法:分離密度相差不大、重量和大小區分較大的樣品。

將樣品置於平緩的預先制好的密度梯度介質上,進行離心,較大的顆粒將比較小的顆粒更快地沉降。通過梯度介質,形成幾個明顯的區帶(條帶)。這種方法有時間限制,在任一區帶到達管底之前必須停止離心。

大小相同、密度不同的顆粒(如溶酶體、線粒體和過氧化物酶體)不能用本法分離。(2

)等密度區帶離心法:用於樣品顆粒的浮力密度差,密度差越大的樣品分離效果越好,與顆粒大小和形狀無關。離心管中預先放置好梯度介質,樣品加在梯度液麵上,或樣品預先與梯度介質溶液混合後裝入離心管,通過離心形成梯度。

離心時,樣品的不同顆粒向上浮起,一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上,形成幾條不同的區帶,這就是等密度離心法。離心所需時間以最小顆粒到達等密度點(即平衡點)的時間為基準,有時長達數日。

等密度區帶離心法所用的梯度介質通常為氯化銫cs

cl,其密度可達

1.7g/cm3 。此法可分離核酸、亞細胞器等,也可以分離複合蛋白質,但簡單蛋白質不適用。

2.密度梯度離心法的優缺點

優點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應範圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性。

缺點是:①離心時間較長;②需要製備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。

3樓:呂錦頓星海

差速離心法,這種離心方法只能將那些大小有顯著差異的組分分開!而密度梯度離心則是較為精細的分離手段,這種方法的關鍵是先在離心管中製備出蔗糖或氯化銫等介質的濃度梯度並將細胞勻漿裝在最上層,密度梯度的介質可以穩定沉澱成分,防止對流混合,在此條件下離心,細胞不同組分將以不同速率沉降並形成不同沉降帶。

高中生物裡面,什麼用到了差速離心法?什麼用到了梯度離心法?

4樓:愛笑的任玉傑

觀察線粒體、葉綠體、蛋白質的結構時用到了

差速離心法。

利用同位素標記法觀察dna時用到了梯度離心法。

密度梯度離心中單一樣品組份的分離是藉助於混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達到的;差速離心法是用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離。

密度梯度離心只用一個離心轉速,而差速離心用兩個甚至更多的轉速。密度梯度離心的物質是密度有一定差異的,而差速離心是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分。

5樓:匿名使用者

差速離心法(離心法):交替使用低速和高速離心,用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法。此法適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分的分離。

梯度離心法(濃度梯度):細胞內的物質具有一定的濃度,把細胞放入清水中,細胞吸水漲破。除去細胞內的其他物質,得到細胞膜。

密度梯度區帶離心法(簡稱區帶離心法),是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。此法的優點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應範圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性,並防止已形成的區帶由於對流而引起混合。

此法的缺點是:①離心時間較長;②需要製備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。

6樓:汝州人

分離細胞器用差速離心

dna半保留複製的證據那一節,用了氯化銫密度梯度離心------在必修二課本上,屬於選學內容

7樓:匿名使用者

分離細胞中的細胞器用差速離心法;**dna的複製方式用梯度離心法。

8樓:這不知足的滿足

差速離心:膜的製備,分離細胞器。

梯度離心不知

9樓:像自由一樣飛翔

其實高中並不涉及他們的區分

10樓:匿名使用者

分離不同重量的物質,比如分離細胞中不同的細胞器。

11樓:牛腿康

分離單細胞生物?分離哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈

差速離心法和密度梯度離心法的區別

12樓:甜小糖

區別一:定義不同

差速離心法:差速離心主要是採取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞器。起始的離心速度較低,讓較大的顆粒沉降到管底,小的顆粒仍然懸浮在上清液中。

收集沉澱,改用較高的離心速度離心懸浮液,將較小的顆粒沉降,以此類推,達到分離不同大小顆粒的目的。

密度梯度離心法:用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度,將細胞混懸液或勻漿置於介質的頂部,通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。

區別二:原理不同

差速離心法:物體圍繞中心軸旋轉時會受到離心力f的作用。當物體的質量為 m、體積為v、密度為d、旋轉半徑為r、角速度為(弧度數/秒)時,可得:

f=mω2r 或者 f=v.d.ω2r 。

密度梯度離心法:不同顆粒之間存在沉降係數差時,在一定離心力作用下,顆粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同區域上形成區帶的方法。

區別三:轉速不同

差速離心法:用多個離心轉速。

密度梯度離心法:只用一個離心轉速。

區別四:密度不同

差速離心法:是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分。

密度梯度離心:用此方法的物質密度有一定差異的。

13樓:從小就愛玩

差速離心法,這種離心方法只能將那些大小有顯著差異的組分分開!而密度梯度離心則是較為精細的分離手段,這種方法的關鍵是先在離心管中製備出蔗糖或氯化銫等介質的濃度梯度並將細胞勻漿裝在最上層,密度梯度的介質可以穩定沉澱成分,防止對流混合,在此條件下離心,細胞不同組分將以不同速率沉降並形成不同沉降帶。

14樓:yn桃李醉春風

一、密度梯度離心法和差速離心法的區別

1. 差速離心法是用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離,密度梯度離心中單一樣品組份的分離是藉助於混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達到的。

2. 差速離心用兩個甚至更多的轉速,而密度梯度離心只用一個離心轉速。

3. 差速離心是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大的組分,而密度梯度離心的物質是密度有一定差異的。

二、差速離心法

差速離心法是交替使用低速和高速離心,用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法。此法適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分的分離。

1. 沉降係數

使用離心法時,大分子沉降速度的量度,等於每單位離心場的速度。或 s=v/ω2r,s 是沉降係數, ω 是離心轉子的角速度(弧度 / 秒), r 是到旋轉中心的距離, v 是沉降速度。沉降係數以每單位重力的沉降時間表示,並且通常為 1 ~ 200×10-13 秒範圍, 10-13 這個因子叫做沉降單位 s ,即 1s=10-13 秒,如血紅蛋白的沉降係數約為 4×10 -13 秒或 4s 。

大多數蛋白質和核酸的沉降係數在 4s 和 40s 之間,核糖體及其亞基在 30s 和 80s 之間,多核糖體在 100s 以上。

2. 差速離心法的優缺點

差速離心法的優點是樣品的處理量較大,可用於大量樣品的初分離。其缺點是分離複雜樣品和要求分離純度較高時,離心次數多,操作繁雜。由於沉澱的多次清洗、溶解、再沉澱,容易引起中間損失,所以離心分辨力差。

實際分離時由於離心時的對流、擴散和收取沉澱時的汙染,對於一些沉降係數相差不大的組分無法進行完全的分離提純。產品的純度和**率都達不到上述理論值。因此差速離心法主要用於大量樣品的初步分離提純。

三、密度梯度離心法

密度梯度離心法又稱為區帶離心法,是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。

1. 分類

( 1 )差速區帶離心法:分離密度相差不大、重量和大小區分較大的樣品。 將樣品置於平緩的預先制好的密度梯度介質上,進行離心,較大的顆粒將比較小的顆粒更快地沉降。

通過梯度介質,形成幾個明顯的區帶(條帶)。這種方法有時間限制,在任一區帶到達管底之前必須停止離心。大小相同、密度不同的顆粒(如溶酶體、線粒體和過氧化物酶體)不能用本法分離。

( 2 )等密度區帶離心法:用於樣品顆粒的浮力密度差,密度差越大的樣品分離效果越好,與顆粒大小和形狀無關。離心管中預先放置好梯度介質,樣品加在梯度液麵上,或樣品預先與梯度介質溶液混合後裝入離心管,通過離心形成梯度。

離心時,樣品的不同顆粒向上浮起,一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上,形成幾條不同的區帶,這就是等密度離心法。離心所需時間以最小顆粒到達等密度點(即平衡點)的時間為基準,有時長達數日。

等密度區帶離心法所用的梯度介質通常為氯化銫 c s cl ,其密度可達 1.7 g/cm3 。此法可分離核酸、亞細胞器等,也可以分離複合蛋白質,但簡單蛋白質不適用。

2. 密度梯度離心法的優缺點

優點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應範圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性。

缺點是:①離心時間較長;②需要製備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。

高中生物離心與差速離心實驗方法的區別

如果不特別說明,離心一般是在一定的轉速下進行一段時間,將要分離的東西分開。而差速離心則是用一定的轉速將物質分成兩部分後,將上清液再用更高的轉速離心,分成層後如果需要還要用更高的轉速再將上清液離心,直到將物質完全分成不同的層次為止。高中生物哪些實驗用到了差速離心法 高中生物中用到差速離心的實驗一般考慮...

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