1樓：匿名使用者
這個flag標籤抗體能檢測到其他帶flag標籤的蛋白嗎？
例如空載對照。如果空載也不行，那基本抗體就歇了。
如果有，就要看flag標籤是不是正確表達了，如果表達不正確也會影響到檢測的。
用western檢測真核表達的帶有flag標籤的融合蛋白時，能用目的蛋白本身的抗體進行檢測，但用flag抗體確無法
2樓：匿名使用者
看你的flag抗體是否有問題，我是做抗體生產的，原來開發flag抗體時就會對其進行c端、n端、m端的qc檢測，正常情況下三端都需要有識別，我擔心你的抗flag抗體有可能不識別n端，還有一種可能就是你的融合蛋白不含flag標籤。你可以從這兩個方面入手解決，至於你運用什麼實驗設計，我想你應該完全沒問題。預祝你能夠順利解決此疑問。
3樓：匿名使用者
你能確定你的flag標籤管用嗎？如果flag標籤失效了，什麼都白搭。
4樓：快樂
做western時候 導致失敗的因素太多了 樓主能再說的詳細些嗎？站內吧
flag標籤作用 5
5樓：
可以通過基因工程技術手段將所要研究的目的基因和flag-tag基因序列連線起來，可以連線在目的蛋白的c端或n端， 然後將整合後的基因轉入細胞中或胚胎幹細胞抑或受精卵中。
後續檢測主要通過flag-tag這段肽鏈形成的免疫決定簇與其單克隆抗體的特異性結合來實現。 檢測手段有免疫熒光(immunofluorescence)， 免疫印記(western blotting)等。
隨著生物技術的發展，科研人員可以通過dna重組技術，構建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白，進而通過特異性標籤抗體對其鑑定與純化，以達到研究的需求。
擴充套件資料
flag-tag類別：
1、flag抗體-抗flag標籤抗體
融合標籤，如flag、gst等標籤的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件視覺化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。
2、gst抗體-抗gst標籤抗體
隨著越來越多的新基因的發現，基因融合蛋白表達體系以其在新發現蛋白研究中的顯著優勢已得到廣泛應用。其中gst標籤體系具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便，以及利於gst抗體制備等特點。
3、ha抗體-抗ha標籤抗體
融合標籤，如ha、his等標籤的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件視覺化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。常用的標籤包括myc、ha、flag、his、gst等。
6樓：s小作者
flag標籤蛋白為編碼8個氨基酸的親水性多肽（dykddddk），同時載體中構建的kozak序列使得帶有flag的融合蛋白在真核表達系統中表達效率更高。 flag作為標籤蛋白，其融合表達目的蛋白後具有以下優點：
· flag作為融合表達標籤，其通常不會與目的蛋白相互作用並且通常不會影響目的蛋白的功能、性質，這樣就有利用研究人員對融合蛋白進行下游研究。
· 融合flag的目的蛋白，可以直接通過flag進行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的融合蛋白，並且純化效率高。
· flag作為標籤蛋白，其可以被抗flag的抗體識別，這樣就方便通過western blot、elisa等方法對含有flag的融合蛋白進行檢測、鑑定。
· 融合在n端的flag，其可以被腸激酶切除（dddk），從而得到特異的目的蛋白。因此現flag標籤已廣泛的應用於蛋白表達、純化、鑑定、功能研究及其蛋白相互作用等相關領域。
希望對你有幫助哦～＾＾～
含flag標籤的融合蛋白在細胞內如何定位
7樓：紫電
flag標籤一般不影響細胞定位的，這個蛋白本身的細胞定位是**，融合之後還是**啊。
8樓：匿名使用者
flag標籤是重組蛋白的純化標籤，非定位標籤
flag tag是什麼
9樓：血魔法師
flag標籤蛋白
flag標籤蛋白為編碼8個氨基酸的親水性多肽（dykddddk），同時載體中構建的kozak序列使得帶有flag的融合蛋白在真核表達系統中表達效率更高。 flag作為標籤蛋白，其融合表達目的蛋白後具有以下優點：
flag作為融合表達標籤，其通常不會與目的蛋白相互作用並且通常不會影響目的蛋白的功能、性質，這樣就有利用研究人員對融合蛋白進行下游研究。
融合flag的目的蛋白，可以直接通過flag進行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的融合蛋白，並且純化效率高。
flag作為標籤蛋白，其可以被抗flag的抗體識別，這樣就方便通過western blot、elisa等方法對含有flag的融合蛋白進行檢測、鑑定。
融合在n端的flag，其可以被腸激酶切除（dddk），從而得到特異的目的蛋白。因此現flag標籤已廣泛的應用於蛋白表達、純化、鑑定、功能研究及其蛋白相互作用等相關領域。
一個什麼公司的產品介紹裡的 找不著連結了就不貼引用了
說白了就是做表達出來的蛋白的一個標籤
10樓：匿名使用者
flag tag用於表達重組蛋白，便於western檢測。
構建標籤蛋白，因為沒有內源性抗體，所以就用標籤wb檢測，怎麼都檢測不到目的蛋白（跨膜蛋白）
11樓：手機使用者
方法一：western blot and strip通過wb檢測所有發生泛素化的蛋白條帶，拍照後，將膜strip。然後與特定蛋白的抗體和特定泛素化位點的抗體反應，顯色拍照406通過陽性條帶的對比來初步判斷某一特定蛋白的特定位點發生了泛素化方法二：
western blot and immunoprecipitations 通過免疫共沉澱方法將某一特定蛋白以及與其結合的蛋白分離出來。分離出來的蛋白再進行sds電泳和western blot分析。這一方法可以明確具體哪個蛋白的哪個賴氨酸殘基發生了泛素化修飾。
方法三：in vitro ubiquitination assay將要研究的目的基因轉染293細胞waei使其大量表達。24h後提取並分離目的蛋白。
在體外反應buffer中將我們要研究的蛋白a（被泛素化的那個蛋白）與ube1ubeh13－uev 1 a heterodimer ***plex waha－ubiquitin以及我們要研究的蛋白b（引起蛋白a泛素化的蛋白）62共同進行孵育。將孵育後的產物進行ip和wb分析。這一方法可以明確引起哪個蛋白是引起某蛋白髮生泛素化修飾的e3連線酶。
方法四：in vitro ubiquitin－binding assay將我們要研究的蛋白（被泛素化的蛋白）基因轉染293細胞大量表達後提純。或者直接提取內源性蛋白。
在體外與k63－ or k48－linked ubiquitin chain petides孵育，然後通過sds電泳並用泛素化抗體進行檢測。這一方法可以明確要研究的蛋白哪個賴氨酸殘基容易發生泛素化。
falg標籤western blot 抗體為什麼可以與變性的蛋白結合
12樓：匿名使用者
flag標籤融合蛋白
一般都是非變性表達的
做wb的話，不管是否是變性蛋白，和sds結合後都會開啟原有的結構暴露出n端或者c端的標籤，這樣就有了抗原決定簇，抗flag標籤的抗體會和抗原決定簇起免疫反應。所以說作為抗原，是否變性都沒關係的。
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我將每天做數學題用英語怎麼說,我喜歡做數學題用英語怎麼說
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