1樓：匿名使用者
1．底物濃度 除選擇適合的底物外，在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係，在酶活性測定時，要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。
2．酶濃度 在反應條件一定時，酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說，只有[s]>>[e]時，酶才能被底物分子飽和，反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時，應將標本適當稀釋後再加以測定。
3．溫度 不同的酶最適溫度可以不同，多數酶的最適溫度在37～40℃。高於或低於最適溫度,酶活性都降低。
4．離子強度和ph值 在最適ph時，酶的活性最強，高於或低於最適ph，酶的活性都降低。
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性，因此在酶活性測定時，就要保證輔基或輔酶的供給。
6．啟用劑 有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高。因此在酶活性測定時也，要滿足酶對啟用劑的需要。
7．抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制；丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制；哇巴因對na+，k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制.抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時，應避免抑制劑的影響。
在測定酶活力時,為什麼對試劑配置、實際用量、血清用量、溫度、ph、作用時間均需嚴格控制?求認真解答
2樓：時玉娟娟
澱粉酶活力的測定
一、目的
學習和掌握測定澱粉酶（包括α-澱粉酶和β-澱粉酶）活力的原理和方法.
二、原理
澱粉是植物最主要的貯藏多糖,也是人和動物的重要食物和發酵工業的基本原料.澱粉經澱粉酶作用後生成葡萄糖、麥芽糖等小分子物質而被機體利用.澱粉酶主要包括α-澱粉酶和β-澱粉酶兩種.
α-澱粉酶可隨機地作用於澱粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時使澱粉的粘度降低,因此又稱為液化酶.β-澱粉酶可從澱粉的非還原性末端進行水解,每次水解下一分子麥芽糖,又被稱為糖化酶.澱粉酶催化產生的這些還原糖能使3,5-二硝基水楊酸還原,生成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸,其反應如下：
澱粉酶活力的大小與產生的還原糖的量成正比.用標準濃度的麥芽糖溶液製作標準曲線,用比色法測定澱粉酶作用於澱粉後生成的還原糖的量,以單位重量樣品在一定時間內生成的麥芽糖的量表示酶活力.
澱粉酶存在於幾乎所有植物中,特別是萌發後的禾穀類種子,澱粉酶活力最強,其中主要是α-澱粉酶和β-澱粉酶.兩種澱粉酶特性不同,α-澱粉酶不耐酸,在ph3.6以下迅速鈍化.
β-澱粉酶不耐熱,在70℃15min鈍化.根據它們的這種特性,在測定活力時鈍化其中之一,就可測出另一種澱粉酶的活力.本實驗採用加熱的方法鈍化β-澱粉酶,測出α-澱粉酶的活力.
在非鈍化條件下測定澱粉酶總活力（α-澱粉酶活力+β-澱粉酶活力）,再減去α-澱粉酶的活力,就可求出β-澱粉酶的活力.
三、實驗材料、主要儀器和試劑
1．實驗材料
萌發的小麥種子（芽長約1cm）
2．儀器
（1）離心機
（2）離心管
（3）研缽
（4）電爐
（5）容量瓶：50ml×1, 100ml×1
（6）恆溫水浴
（7）20ml具塞刻度試管×13
（8）試管架
（9）刻度吸管：2ml×3, 1ml×2, 10ml×1
（10）分光光度計
3．試劑（均為分析純）
（1）標準麥芽糖溶液（1mg/ml）：精確稱取100mg麥芽糖,用蒸餾水溶解並定容至100ml.
（2）3,5-二硝基水楊酸試劑：精確稱取3,5-二硝基水楊酸1g,溶於20ml 2mol/l naoh溶液中,加入50ml蒸餾水,再加入30g酒石酸鉀鈉,待溶解後用蒸餾水定容至100ml.蓋緊瓶塞,勿使co2進入.
若溶液混濁可過濾後使用.
（3）0.1mol/l ph5.6的檸檬酸緩衝液
a液：（0.1mol/l 檸檬酸）：稱取c6h8o7·h2o 21.01g,用蒸餾水溶解並定容至1l.
b液：（0.1mol/l檸檬酸鈉）：稱取na3c6h5o7·2h2o 29.41g,用蒸餾水溶解並定容至1l.
取a液55ml與b液145ml混勻,既為0.1mol/lph5.6的檸檬酸緩衝液.
（4）1%澱粉溶液：稱取1g澱粉溶於100ml 0.1mol/l ph5.6的檸檬酸緩衝液中.
四、操作步驟
1．麥芽糖標準曲線的製作
取7支幹淨的具塞刻度試管,編號,按表1加入試劑：
表1 麥芽糖標準曲線製作
試 劑管 號12
3456
7麥芽糖標準液（ml）
00.2
0.61.0
1.41.8
2.0蒸餾水（ml）
2.01.8
1.41.0
0.60.2
0麥芽糖含量（mg）
00.2
0.61.0
1.41.8
2.03,5-二硝基水楊酸（ml）
2.02.0
2.02.0
2.02.0
2.0搖勻,置沸水浴中煮沸5min.取出後流水冷卻,加蒸餾水定容至20ml.
以1號管作為空白調零點,在540nm波長下比色測定光密度.以麥芽糖含量為橫座標,光密度為縱座標,繪製標準曲線.
2．澱粉酶液的製備
稱取1g萌發3天的小麥種子（芽長約1cm）,置於研缽中,加入少量石英砂和2ml蒸餾水,研磨勻漿.將勻漿倒入離心管中,用6ml蒸餾水分次將殘渣洗入離心管.提取液在室溫下放置提取15～20min,每隔數分鐘攪動1次,使其充分提取.
然後在3 000r/min轉速下離心10min,將上清液倒入100ml容量瓶中,加蒸餾水定容至刻度,搖勻,即為澱粉酶原液,用於α-澱粉酶活力測定.
吸取上述澱粉酶原液10ml,放入50ml容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,搖勻,即為澱粉酶稀釋液,用於澱粉酶總活力的測定.
2． 酶活力的測定：取6支幹淨的試管,編號,按表2進行操作.
表2 酶活力測定取樣表
操 作 項 目 α‑澱粉酶活力測定 β-澱粉酶活力測定
ⅰ- 1 ⅰ- 2 ⅰ- 3 ⅱ- 4 ⅱ- 5 ⅱ- 6
澱粉酶原液（ml） 1.0 1.0 1.0 0 0 0
鈍化β-澱粉酶 置70℃水浴15min,冷卻
澱粉酶稀釋液（ml） 0 0 0 1.0 1.0 1.0
3,5-二硝基水楊酸（ml） 2.0 0 0 2.0 0. 0
預保溫 將各試管和澱粉溶液置於40℃恆溫水浴中保溫10min
1%澱粉溶液（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
保溫 在40℃恆溫水浴中準確保溫5min
3,5-二硝基水楊酸（ml） 0 2.0 2.0 0 2.0 2.0
將各試管搖勻,顯色後進行比色測定光密度,記錄測定結果,操作同標準曲線.
五、結果計算
計算ⅰ- 2、ⅰ- 3光密度平均值與ⅰ- 1光密度之差,在標準曲線上查出相應的麥芽糖含量（mg）,按下列公式計算α- 澱粉酶的活力.
計算ⅱ- 2、ⅱ- 3光密度平均值與ⅱ- 1光密度之差,在標準曲線上查出相應的麥芽糖含量（mg）,按下式計算（α＋β）澱粉酶總活力.
β-澱粉酶活力＝（α＋β）澱粉酶總活力－α-澱粉酶活力
六、附 注
（1）樣品提取液的定容體積和酶液稀釋倍數可根據不同材料酶活性的大小而定.
（2）為了確保酶促反應時間的準確性,在進行保溫這一步驟時,可以將各試管每隔一定時間依次放入恆溫水浴,準確記錄時間,到達5min時取出試管,立即加入3,5-二硝基水楊酸以終止酶反應,以便儘量減小因各試管保溫時間不同而引起的誤差.同時恆溫水浴溫度變化應不超過±0.5℃.
（3）如果條件允許,各實驗小組可採用不同材料,例如萌發1d、2d、3d、4d的小麥種子,比較測定結果,以瞭解萌發過程中這兩種澱粉酶活性的變化.
推薦**：
在測定酶活力時,為什麼對試劑配置、實際用量、血清用量、溫度、ph、作用時間均需嚴格控制? 5
3樓：匿名使用者
穀物種子萌發時澱粉酶活力的測定
幾乎所有植物中都存在澱粉酶，尤其是萌發的禾穀類種子，澱粉酶活性最強。主要是α-澱粉酶和β-澱粉酶。種子萌發時，澱粉酶活性隨萌發時間迅速增加，將澱粉分解成小分子糖類，供幼苗生長。
α-澱粉酶隨機水解澱粉的α-1，4-糖苷鍵，作為澱粉分解的起始酶而起主要作用；其水解產物為麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原性糖；β-澱粉酶水解非還原端的第二個α-1，4-糖苷鍵，水解產物為麥芽糖，並能使一部分糊精糖化。本實驗以萌發種子為材料，測定其中α-澱粉酶和β-澱粉酶活性的差異。
【原理】
兩種澱粉酶具有不同理化特性，α-澱粉酶不耐酸，在ph3
進行酶活力測定時應注意什麼,酶活力測定的注意事項有哪些？
底物濃度 酶濃度 溫度 離子強度和ph值 輔助因子 啟用劑 抑制劑 進行酶活力測定時應注意什麼 測定酶活力時，必須注意以下幾點 1 酶促反應過程中，只有最初一段時間內反應速度與酶濃度成正比，隨著反應時間的延長，反應速度即逐漸降低。2 要規定一定的反應條件，如時間 溫度 ph等，並在酶測定過程中保持這...
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