過氧化物酶染色,免疫過氧化物酶染色和免疫熒光有沒有很大區別

2021-03-03 21:44:18 字數 1515 閱讀 7254

1樓:匿名使用者

過氧化物酶染色 過氧化物酶染色(一)四甲基聯苯胺法生物

原理粒細胞和單核細胞的胞漿內的髓過氧化物酶(poxormpo)分解過氧化氫,釋放新生態氧,使無色聯苯胺氧化成藍色聯苯胺,後者進一步變成棕色化合物沉著於細胞質內。 試劑

1%tmb、亞硝基鐵***飽和溶液、1%過氧化氫溶液、稀過氧w化氫溶液、瑞氏染色液操作

1、取0.1%tmb乙醇溶液lml,加亞硝基鐵***飽和溶液10ml,溶液呈淡棕黃色。

2、在新鮮乾燥的血片上,加混合溶液0.5ml,放置lmin後,再加稀過氧化氫溶液0.7ml,染色6min。

3.瑞氏染液復染15~20min。

4.油鏡鏡檢。結果

細胞質內有藍黑色顆粒者為陽性。

(-)無顆粒沉著;

(±)顆粒細小,分佈稀疏;

(+)顆粒較粗,局灶分佈;

(++)顆粒粗大,分佈較密,佔胞質1/2~2/3;

(+++)顆粒粗大,呈團塊分佈;

(++++)全部胞質均部滿顆粒,可覆胞核。臨床意義

pox主要分佈在粒細胞和單核細胞內,隨著粒細胞成熟的程度而逐漸增強,中性分葉核粒細胞為強陽性。嗜酸性粒細胞陽性程度最強,其陽性顆粒比中性粒細胞粗大,有折光。鹼性粒細胞為陰性。

(2)單核細胞:

原始單核細胞為陰性反應,幼稚單核細胞和成熟單核細胞呈弱陽性反應,顆粒細小,彌散分佈。(3)其他細胞

淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、組織細胞、巨核細胞均呈陰性反應。(4)血小板過氧化物酶

主要定位於幼稚型巨核細胞的核膜上,可作為原巨核細胞的一種標誌物,有助於fabm7的識別。(5)過氧化物酶染色

主要用於鑑別急性白血病型別,急性髓細胞白血病多呈陽性反,以m3和m2型反應最強,mi和m5型反較弱,s故有助於區別m3和m5型。s急性淋巴細胞白血病呈pox陰性反,故為急性髓細胞和淋巴細胞白血病鑑別的重要指標。

免疫過氧化物酶染色和免疫熒光有沒有很大區別

2樓:匿名使用者

1、問:用免疫熒光方法做組織切片和培養細胞內的蛋白,兩者操作過程有哪些不同?

參考見解:只是固定方法不同。細胞固定用甲醇,切片固定用多聚甲醛,而染色方法是一樣的。

2、問:近期要做免疫熒光雙標,不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟及其注意事項?

參考見解:我正在做冰凍組織切片的免疫熒光雙染。我的經驗是:

(1)選取一抗時要**於兩種不同的動物,我用的是**於rabbit和rat的抗體,二抗則是不同熒光訊號標記的,我用的是donkey anti-rabbit-fitc(綠)和donkey anti-rat-tex-red(紅)。

(2)我的做法是兩種一抗(chi抗體)同時孵育,然後兩種二抗同時孵育。抗體濃度、孵育時間要仔細摸索,我感覺一抗4度孵育過夜比較好,背景比較清晰。

(3)我的陽性對照用的是陽性組織切片,陰性對照則分別是家兔和大鼠的igg,熒游標記物對照是pbs+熒游標記物。

(4)封閉血清與二抗**動物一致,我用的是10%的正常donkey血清。

(5)其餘步驟同一般免疫熒光單標操作。

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