1樓：匿名使用者
**是猴腎細胞,當然是真核.只要有真核啟動子的表達質粒都可以用來表達.pcdna3.
1 /ct-gfp-topo的可能意思是以pcdna 3.1 為骨架,克隆插入有目的基因,在c端有gfp的融合蛋白.當然也有可能有其他意思,要看序列而定.
理解就可以了,文章中是不需要翻譯的.
pcdna3.1重組質粒用脂質體轉染原代培養細胞能穩定表達嗎
2樓：北京索萊寶科技****
真核表達載體pcdna3.1-β澱粉樣前體蛋白裂解酶的構建及其在cos-7細胞中瞬時表達
【摘 要】 目的 構建β澱粉樣前體蛋白裂解酶（β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme,bace）基因的真核表達載體,為修復阿爾茨海默病(alzheimer's disease,ad)損傷神經元奠定基礎.方法 採用rt-pcr方法,從人的成神經細胞瘤的總cdna中,擴增出1.5kb的bace cdn**段,再用bamhi和xhoi雙酶切後定向克隆到真核細胞表達載體pcdna3.
1中,用限制性內切酶酶切分析和dna序列分析鑑定重組質粒；以免疫細胞化學法檢測bace基因的表達情況.結果 人bace基因的cdna已克隆到真核細胞表達載體pcdna3.1質粒中；經脂質體轉染cos-7細胞後,並由潮黴素進行篩選,可見轉染細胞胞漿中和胞膜上有較高量的bace蛋白表達.
結論 成功構建了pcdna3.1-bace的真核表達載體,為研究bace基因在ad發病機制中的作用及抑制bace,為**ad奠定一定的實驗基礎.
含cmv啟動子的真核載體如pcdna3.1能在黴菌或酵母中表達嗎
3樓：
區別主要在表達重組元件還有基因標記。promoter，terminater是宿主識別的的,真核可能還需要enhancer,重組到基因組中的話，需要介導重組的序列。篩選標記絕大多數不一樣。
真核表達載體在宿主中以質粒形式存在的，可以複製。哺乳動物細胞裡沒有質粒，外源基因整合到基因組中的，所以不能擴增。由於整合多個位點而產生多拷貝。
如果說載體的重組，沒區別，都是一樣的酶切加連線。細菌轉化也一樣。真核載體在細菌中也可以進行增值。
表達的話，一般原核是直接轉化細菌通過ispg誘導進行表達，蛋白表達後的形式一般是通過包涵體或者是分泌型蛋白存在，這種蛋白如果是真核基因**，不一定擁有相應的蛋白生物活性，因為原核表達缺少真核轉錄後的蛋白修飾機制。但是原核表達的蛋白容易純化，很容易獲得純化蛋白做為免疫原等進行使用。
而真核表達則是通過脂質體或者是pei的等轉染試劑在體外通過和質粒形成複合體， 將質粒匯入細胞後進行瞬時表達。稱為瞬時表達的原因是因為質粒在真核細胞中不能擴增。並且不斷被細胞所降解，這種表達在一定的時間後就會消失。
除非質粒被整合進入細胞的基因組，通過質粒上帶的篩選標記，如g418等，通過篩選得到一株穩定表達你的目的蛋白的細胞克隆。但是這種細胞克隆的表達量相比瞬時表達會非常低甚至於檢測不到。真核表達的特點是所表達的蛋白一旦表達即擁有相應的生物學活性，因此真核瞬時轉染往往用於研究單個基因在細胞中的功能。
而不能用於純化蛋白。
此外，真核表達還有用於昆蟲細胞的桿狀病毒表面展示系統，其本質也是通過轉染含有目的基因的重組質粒（特殊質粒，專用於桿狀病毒表面展示系統）給昆蟲細胞，然後使用野生型的桿狀病毒或者是人工改造過的桿狀病毒來感染相應的細胞，來是病毒和質粒在昆蟲細胞體內發生重組，獲得目的基因，並且最終表達於病毒子的表面，所以成為表面展示系統。
如果是將目的基因轉入動物細胞，在基因表達載體構建這一步，用的是什麼載體，還是質粒？ 5
4樓：匿名使用者
將目的基因轉入動物細胞，在基因表達載體構建這一步，用的肯定是質粒。沒有質粒就沒法進行構建。
常用的質粒有兩種，一種是真核表達質粒，比如pcdna3.1等，它們有真核啟動子比如cmv，可以進行瞬時轉染。另一種是病毒質粒，比如逆轉錄病毒質粒等，它們可以包裝成逆轉錄病毒，整合到細胞基因組中，穩定地遺傳並表達。
但不論哪種載體，在構建的時候，一定是以質粒的形式進行的，否則無法操作。
5樓：靈魂王子的心痛
將目的基因轉入真核細胞，一般不用質粒，因為質粒是原核生物裡面的，在真核細胞中表達可能會有問題。而且質粒能夠攜帶的目的片段較小。
真核生物的表達載體一般用人工染色體，它能容納較大的外源基因片段或者用病毒，它能侵染細胞，將目的基因代入細胞中。
6樓：林蕾
用的載體是動物病毒，這個高中生物人教版選修三就有
如何構建重組熒光質粒轉染後穩定表達的細胞系
7樓：匿名使用者
這個要看細胞的狀態和蛋白表達特點。推薦瞭解「主細胞庫」「工作細胞庫」這兩個名詞。
真核表達質粒pcDNA31有哪些性質和特點
有用於表達外源基因的cmv啟動子，用於篩選的青黴素抗性基因，用於外源基因克隆的多克隆酶切位點mcs,提供轉錄終止訊號的bgh 不知這上面有沒有能幫到你的資料。我才疏學淺，現在還徘徊在原核生物質粒dna的研究中 含cmv啟動子的真核載體如pcdna3.1能在黴菌或酵母中表達嗎 區別主要在表達重組元件還...
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