1樓:匿名使用者
有用於表達外源基因的cmv啟動子,用於篩選的青黴素抗性基因,用於外源基因克隆的多克隆酶切位點mcs,提供轉錄終止訊號的bgh
2樓:乙醯苯胺
不知這上面有沒有能幫到你的資料。
我才疏學淺,現在還徘徊在原核生物質粒dna的研究中……
含cmv啟動子的真核載體如pcdna3.1能在黴菌或酵母中表達嗎
3樓:
區別主要在表達重組元件還有基因標記。promoter,terminater是宿主識別的的,真核可能還需要enhancer,重組到基因組中的話,需要介導重組的序列。篩選標記絕大多數不一樣。
真核表達載體在宿主中以質粒形式存在的,可以複製。哺乳動物細胞裡沒有質粒,外源基因整合到基因組中的,所以不能擴增。由於整合多個位點而產生多拷貝。
如果說載體的重組,沒區別,都是一樣的酶切加連線。細菌轉化也一樣。真核載體在細菌中也可以進行增值。
表達的話,一般原核是直接轉化細菌通過ispg誘導進行表達,蛋白表達後的形式一般是通過包涵體或者是分泌型蛋白存在,這種蛋白如果是真核基因**,不一定擁有相應的蛋白生物活性,因為原核表達缺少真核轉錄後的蛋白修飾機制。但是原核表達的蛋白容易純化,很容易獲得純化蛋白做為免疫原等進行使用。
而真核表達則是通過脂質體或者是pei的等轉染試劑在體外通過和質粒形成複合體, 將質粒匯入細胞後進行瞬時表達。稱為瞬時表達的原因是因為質粒在真核細胞中不能擴增。並且不斷被細胞所降解,這種表達在一定的時間後就會消失。
除非質粒被整合進入細胞的基因組,通過質粒上帶的篩選標記,如g418等,通過篩選得到一株穩定表達你的目的蛋白的細胞克隆。但是這種細胞克隆的表達量相比瞬時表達會非常低甚至於檢測不到。真核表達的特點是所表達的蛋白一旦表達即擁有相應的生物學活性,因此真核瞬時轉染往往用於研究單個基因在細胞中的功能。
而不能用於純化蛋白。
此外,真核表達還有用於昆蟲細胞的桿狀病毒表面展示系統,其本質也是通過轉染含有目的基因的重組質粒(特殊質粒,專用於桿狀病毒表面展示系統)給昆蟲細胞,然後使用野生型的桿狀病毒或者是人工改造過的桿狀病毒來感染相應的細胞,來是病毒和質粒在昆蟲細胞體內發生重組,獲得目的基因,並且最終表達於病毒子的表面,所以成為表面展示系統。
真核過表達質粒,原核過表達質粒的區別~急求~~
4樓:學雅思
一、指代不同
1、真核過表達質粒:真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
2、原核過表達質粒:能攜帶插入的外源核酸序列進入原核細胞中進行表達的載體。
二、特性不同
1、真核過表達質粒:該質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
2、原核過表達質粒:啟動子是dna鏈上一段能與rna聚合酶結合並起始rna合成的序列,它是基因表達不可缺少的重要調控序列。沒有啟動子,基因就不能轉錄。
由於細菌rna聚合酶不能識別真核基因的啟動子,因此原核表達載體所用的啟動子必須是原核啟動子。
三、載體構建不同
1、真核過表達質粒:,由238個氨基酸組成,分子量約為27kd。gfpgfp在包括熱、極端ph和化學變性劑等苛刻條件下都很穩定,用甲醛固定後會持續發出熒光,但在還原環境下熒光會很快熄滅。
2、原核過表達質粒:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。
5樓:匿名使用者
所有的質粒都是在細菌(原核)中構建和擴增的,但要在真核細胞中表達需要真核表達載體,要在原核細胞中表達需要原核表達載體。這兩種載體主要的區別是啟動子和polya加尾訊號的不同,一個適合在原核細胞中表達,一個適合在真核細胞中表達。
你需要哪種質粒取決於你最終需要在哪種細胞中表達目的蛋白,如果你要直接在大腸桿菌中表達目的蛋白,然後用純化的蛋白去處理黑色素瘤細胞,那你就應該用原核載體;如果你要在大腸桿菌中構建質粒,然後把質粒轉染到哺乳細胞中表達目的蛋白,你就應該用真核載體。但無論哪種載體,構建和擴增質粒都是在大腸桿菌中進行的。
至於抗性基因,因為所有質粒都要在大腸桿菌中擴增,所以都帶有大腸桿菌的某種耐藥基因。至於真核耐藥基因則不一定,原核表達載體肯定不需要真核耐藥基因,真核表達載體則有些有真核耐藥基因,有些沒有。另外,原核細胞的kana耐藥基因和真核細胞的neo耐藥基因是同一個基因。
6樓:匿名使用者
質粒只是小型環狀dna分子,你指的真核、原核具體是什麼?
293t細胞為什麼經常用於轉染、蛋白質表達?
7樓:風翼殘念
許多真核表達載體如pcdna3.1中含有sv40病毒的複製起始位點,可以在表達sv40病毒t抗原的細胞系中複製,從而提高外源基因的表達水平。293t細胞就是一種表達sv40病毒t抗原的細胞系,它**於人胚胎腎細胞293hek。
經改造後在其中插入了t抗原,因此用293t細胞做轉染可以獲得較高的表達水平。 293t細胞也可以作為普通的哺乳細胞用於篩選穩定表達的細胞系,不過它貼壁性差,容易脫落,不利於篩選。 3t3細胞是小鼠胚胎成纖維細胞系,它具有明顯的接觸抑制作用,所以易於識別已發生轉化的細胞。
293細胞是人腎上皮細胞系,有多種衍生株,比如hek293,293t/17等,**都是人胚胎腎細胞,其極少表達細胞外配體所需的內生受體,且比較容易轉染,是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。
293t細胞由293細胞通過基因技術派生出的細胞系,是經過腺病毒e1a基因的轉染,能表達sv40大t抗原,含有sv40複製起始點與啟動子區。
載體構建時,如何區分質粒是真核表達還是原核表達,二者的啟動子
這個做你就有點盲目了,我覺得你應該先確定你要原核表達,還是真和表達,確定後,在選擇質粒。正如你所說載體是可以構建的,所以質粒作為載體,其啟動子也是可以構建的,現在實驗室往往自己構建所需要的載體進行表達,就是我需要什麼樣的質粒,我就構建什麼樣的質粒。明白哇。質粒的啟動子不同之處在於原核和真核表達體系的...
請問現在原核表達質粒載體(比如PET載體)的價位大約是多少?可以去那些公司購買呢
第一個,你可以找copy一找你的師兄弟有沒bai有,du再找一找同學有沒有?zhi如果有的話就省了這dao筆錢。或者用你們手頭現有的質粒去換。如果沒有,可以找一些國內的公司去買,因為一些不好明說的原因,國內一些公司也有一些。這樣會便宜一些。如果放心不下,那就如樓上說的,去merck novagen公...
請問什麼是穿梭質粒載體和表達質粒載體
穿梭質粒是指可以在多種宿主下複製。比如說通常能夠在哺乳動物,酵母或者其他細菌複製表達的質粒,同時可以在大腸桿菌內複製。這樣利於對質粒的分子生物學操作和大量製備。表達質粒就是指帶有啟動子,增強子等等,使其在宿主體內不僅僅是可以複製,還能夠通過轉錄翻印,在宿主內表達出相應蛋白的質粒 所謂穿梭,即即可以在...