PCR後電泳是特異性條帶,但測序總是出現結合問題 怎麼辦

2021-03-27 07:24:48 字數 2137 閱讀 5773

1樓:北京索萊寶科技****

第一序列多長?

第二、可以考慮克隆測序,這樣不容易產生結合。

電泳條帶清晰,為什麼卻無法測序

pcr出不來,引物特異性不高怎麼辦

2樓:北京索萊寶科技****

建議:1. 不表達是很可能的,查閱文獻。可以換一種細胞的cdna,也可以重新提一次***的。

2. 引物設計的的時候可以不加酶切位點,與基因的完全匹配,可以適當增加長度(30-40bp)。

3. pcr時可設計一個正對照,保證pcr的過程沒問題。

4.適當降低一點退火溫度,使用兩輪pcr試試

為什麼pcr之後的電泳會出現這樣的條帶

3樓:南京金益柏生物科技****

說明目的基因已經擴增得到

4樓:匿名使用者

第二、可以考慮克隆測序,這樣不容易產生結合.cindybrella(站內聯絡ta):tiger28:

幫頂!我也不懂~哎:tiger19:

jiaxinfish(站內聯絡ta)b保險點的話還是做個taclone再測序,如果不想做ta,就用2個pcr引物直接測序,總會成功一個的吧blackrose8089(站內聯絡ta)換個測序公司試一下,有的公司就是克隆在載體上也測不出來!zoey21(站內聯絡ta)我的pcr產物電泳很好,測序也是結合問題.測序公司反饋說是產物不純,或者引物特異性不好.

你可以考慮重新優化反應體系(不過看來你是不做這步了),或者把目的片段序列告訴測序公司,他們會設計中間引物安排測序.

5樓:匿名使用者

可以考慮克隆測序,這樣不容易產生結合.cindybrella(站內聯絡ta):tiger28:

幫頂!我也不懂~哎專:tiger19:

jiaxinfish(站內聯絡ta)b保險點的話還是屬做個taclone再測序,如果不想做ta,就用2個pcr引物直接測序,總會成功一個的吧blackrose8089(站內聯絡ta)換個測序公司試一下,有的公司就是克隆在載體上也測不出來!zoey21(站內聯絡ta)我的pcr產物電泳很好,測序也是結合問題.測序公司反饋說是產物不純,或者引物特異性不好.

你可以考慮重新優化反應體系(不過看來你是不做這步了),或者把目的片段序列告訴測序公司,他們會設計中間引物安排測序.

pcr兩種公司的酶一家有特異性條帶另一家沒有因為啥

6樓:南京金益柏生物科技****

重組質來粒因為有了外源源片斷,所以會比原來的空質粒大些。如果你電泳顯示如此,大多情況下說明已經連進片斷到載體裡面(突然意識到你的目的片斷很小,可能這個對你不太適用,可能看不出 區別。。)。

然後再pcr,酶切確定。

你的質粒大小是多少?

現在既然梅切,測序都發現沒有目的片斷,你只能重新開始了。。

7樓:海之聲天河驗配

這個好像是生物化學的知識

8樓:濤濤濤

你做的是什麼,一般pcr,還是熒光定量pcr?

梅毒特異性抗體 陽性十 該怎麼辦

9樓:上海九龍**

梅毒一般早期沒有症狀。感染tp後7~60天出現,大多數病人硬下疳為單發版、**無癢、圓權形或橢圓形、邊界清晰的潰瘍,高出皮面,瘡面較清潔,有繼發感染者分泌物多。另外當早期症狀過後就會出現,一期梅毒主要症狀為硬下疳,在***部位發生潰瘍,腹股溝淋巴結腫大;二期梅毒出現**粘膜損害,可有全身皮疹等;三期梅毒除有**粘膜損害外,還可有心血管、骨骼、關節、眼、神經系統等多方面的損害。

因此建議您要及時到正規醫院去查明病情後再針對性的**。

熒光定量pcr方法的特異性和準確度怎麼計算

10樓:南京金益柏生物科技****

特異性主要看檢測的目的樣品是否是專一的,準確度主要看測量資料之間的偏差

組織特異性的qrt-pcr怎麼計算表達量

11樓:南京金益柏生物科技****

(qrt-pcr) ,是一種應用廣泛的研究基因表達模式的方法,尤其是在樣品量少

pcr擴增產物的特異性與哪些因素有關

pcr產物的電泳檢測時間 一般為48h以內,有些最好於當日電泳檢測,大於48h後帶型不規則甚致消失.假陰性,不出現擴增條帶 pcr反應的關鍵環節有 模板核酸的製備,引物的質量與特異性,酶的質量及,pcr迴圈條件.尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。pcr非特異性擴增指的是你進行pcr所擴增出來的條...

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