質粒DNA的提取過程中染色體的去處和原理是什麼

2025-02-26 22:35:16 字數 2578 閱讀 1408

1樓:莘素蘭類秋

首先加入溶液1,:改變細胞膜。

的通透性。加入溶液2:使細胞裂解,釋放出質粒dna和染色體dna,在鹼性條件下,破壞鹼基配對,使這兩種dna都變性。

加入溶液3:使dna分子。

復性。此時,線狀染色體dna的兩條鏈已經全部分開,不會再複合。而質粒dna,由於處於拓撲纏繞狀態而彼此不分開,你可以想象一下,兩個環分開之後也是環環相套的情況。

所以質粒dna能夠很快的找到自己相對應的那條鏈,因此在最適條件下,便可復性。

此時,已經完全分開的線狀染色體dna交聯形成不溶於水的線團結構,纏繞附著在細胞壁碎片上,通過離心可去除。

而質粒dna則留在上清中,通過異丙醇。

沉澱以及70%乙醇。

洗滌後便可得到。

2樓:蒙彩榮藏姬

鹼性條件下,染色體dna雙螺旋結構解開而變性,質粒dna的氫鍵斷裂但兩條互補鏈彼此纏繞。恢復中性時,染色體dna難以復性,質粒dna分子很快復性,離心時染色體dna與細胞碎片一起被沉澱出來,而質粒dna則留在上清液中。

質粒dna提取和細胞基因組dna提取的異同

3樓:惠企百科

不同點。一、提取方法不同。

dna提取主要是ctab方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、鹼裂解法。生物方式:酶法。

質粒抽提方法即去除 rna,將質粒與細菌基因組 dna分開,去除蛋白質及其它雜質,以得到相對純淨的質粒。

二、提取原理不同。

質粒dna提取用到三種溶液以及矽酸纖維膜(超濾柱)。 溶液ⅰ:50 mm葡萄糖 / 25 mmtris-hcl/ 10 mmedta,ph ;溶液ⅱ:

n naoh / 1%sds; 溶液ⅲ:3 m 醋酸鉀/ 2 m 醋酸/75%酒精。

細胞基因組dna提取。

保證核酸一級結構的完整性;核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子;其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的汙染應降低到最低程度;其他核酸分子,如rna,也應儘量去除。

三、提取複雜程度不同。

質粒dna提取一般用沸水浴法和鹼裂解法,它主要是將細胞內的環狀質粒提取出來,一般需要用sds裂解,rna酶降解,然後過柱,再進行洗脫。過程比較簡單。

而基因組dna提取則較為複雜,也需要用sds裂解和rnd酶降解,但降解時間較長,同時對有些革蘭氏陽性細菌還要進行溶菌酶處理,最後用氯仿-苯酚進行除蛋白,這一步重複進行多次,在用氯仿除去多餘的苯酚,用乙醇清洗烘乾後溶於te緩衝液中。整個過程比提質粒更復雜,耗時也更長。

相同點。都是去除 rna、除蛋白質及其它雜質。

質粒dna的提取與基因組dna的提取在原理和方法方面有何異同

4樓:哊點壞

質粒dna提取一般抄用沸水浴法和襲鹼裂解法,bai現在一般都採用du鹼裂解法,並有試劑盒可用zhi。它主要是dao將細胞內的環狀質粒提取出來,一般需要用sds裂解,rna酶降解,然後過柱,再進行洗脫。過程比較簡單。

而基因組dna提取則較為複雜,也需要用sds裂解和rnd酶降解,但降解時間較長,同時對有些革蘭氏陽性細菌還要進行溶菌酶處理,最後用氯仿-苯酚進行除蛋白,這一步重複進行多次,在用氯仿除去多餘的苯酚,用乙醇清洗烘乾後溶於te緩衝液中。整個過程比提質粒更復雜,耗時也更長。

質粒dna提取和細胞基因組dna提取的異同

5樓:匿名使用者

回答都很好了,我這裡就補充下提取質粒dna的試劑盒吧,一般試劑盒公司都有賣的,如biog就不錯的,也有專門用於去內毒素的質粒提取試劑盒。

6樓:匿名使用者

質粒小,復性。

容易, 而染色體dna大 ,不易復性;這導致兩種dna提取採用完全不同的策。

專略。質屬粒dna提取,為了區分於dna,都採用首先從混合物中分離出來,然後逐步純化;而染色體dna提取的策略則為逐步去除其他雜質,最後剩下的就是dna了。質粒dna提取方法有幾種,最常見的鹼裂解法利用鹼變形(加溶液ii)後用醋酸溶液快速復性(溶液iii),這樣使得質粒dna可以復性而溶解,而genomedna不能復性而沉澱,從而將他們分開。

而後面的純化如除蛋白(酚 、氯仿),除鹽(75%酒精),沉澱(酒精、異丙醇等)兩者類似。當然兩者都有很粗略的簡易提法,那就完全大相徑庭啦。

質粒dna提取和細胞基因組dna提取的異同

7樓:網友

質粒dna提取一般用沸水浴法和鹼裂解法,現在一般都採用鹼裂解法,並有試劑盒可用,它主要是將細胞內的環狀質粒提取出來,一般需要用sds裂解,rna酶降解,然後過柱,再進行洗脫。過程比較簡單。

而基因組dna提取則較為複雜,也需要用sds裂解和rnd酶降解,但降解時間較長,同時對有些革蘭氏陽性細菌還要進行溶菌酶處理,最後用氯仿-苯酚進行除蛋白,這一步重複進行多次,在用氯仿除去多餘的苯酚,用乙醇清洗烘乾後溶於te緩衝液中,整個過程比提質粒更復雜,耗時也更多。

質粒中的什麼可使基因整合到受體細胞的染色體上

8樓:秒懂百科

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