1樓：匿名使用者
1 初染 結桐模晶紫。
1min 水洗。
2 媒染 碘液1min 水洗，甩淨。
3 脫色 酒精此步驟最為關鍵，要是時間過長，會將結晶紫的顏色全部局段緩都脫掉，但是時間太短的話就脫不乾淨，影響到復染的效果）所以，如果結晶紫用量沒有過多的話，一燃攜般用30秒立刻洗掉的話就不會出現那樣的問題。
4 復染 復紅1min
只要嚴格控制時間就可以了，沒有什麼技巧，而且很簡單，基本上我每次染色就對著那個時間，總之每次都精確到秒的話就可以做得很好了。
2樓：匿名使用者
初染 加戚局草酸銨結晶紫一滴，約一分鐘，水洗。媒染 滴加碘液衝去殘水，並覆蓋約一分鐘，水洗。脫色 將載玻片上面的御胡水甩淨，，用95％酒高拆讓精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止，約20—30秒鐘，立即用水衝淨酒精。
復染 用番紅液染1—2分鐘，水洗。
我覺得你是浸染的時間不夠，還有用酒精沖洗沒有全面，而且有的地方力度太大。
3樓：匿名使用者
塗的洗的不均勻。
同時要注意精確的卡時間。
我剛開始做實驗的時碧森候也一樣好盯，熟悔襪畝練了就好了。
革蘭氏染色的注意事項
4樓：小吳生活百科
<>注意事項。1、選用活躍生長期菌種染色，老齡的革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性。
2、塗片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性。
3、脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵，脫色不夠造成假陽性，脫色過度造成假陰性。
實驗流程。1、取載玻片用紗布擦乾，載玻片的一面用馬克筆畫乙個小圈（用來大致確定菌液滴的位置）。塗菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、塗片。液體培養基：左手持菌液試管，在酒精燈火焰附近5釐公尺左右開啟管蓋；右手持接種環在火焰中燒灼滅菌，等冷卻後從試管中沾取菌液一環，在潔淨無脂的載玻片上塗直徑2公釐左右的塗膜，最後將接種環在火焰上燒灼滅菌。
固體培養基：先在載玻片上滴一滴無菌水，再用接種環取少量菌體，塗在載玻片上，使其薄而均勻。
3、晾乾：讓塗片在空氣中自然乾燥。
4、固定：讓菌膜朝上，通過火焰2－3次固定（以不燙手為宜）。
5、染色：將固定過的塗片放報紙上，滴加草酸銨結晶紫液，染1分鐘。
6、水洗：用水緩慢沖洗塗片上的染色液，用吸水紙吸乾。簡單染色結束可觀察細胞形態。
7、媒染：滴加1滴碘液，染1分鐘，水洗。
8、脫色：吸去殘留水，連續滴加95％乙醇脫色20－30秒至流出液無紫色，立即水洗。
9、復染：滴加蕃紅復染3－5分鐘，水洗。至此，革蘭氏染色結束。
革蘭氏染色需要注意哪些問題 為什麼
5樓：乾萊資訊諮詢
1、革蘭氏染色。
成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌。
也可被手辯脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受塗片厚薄及乙並歷醇。
用量多少等因素的影響，難以嚴格規定。
2、染色過程中勿使染色液乾涸。用水沖洗後，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。
3、選用幼齡的細菌。g+菌培養絕薯搜12h-16h，培養24h。若菌齡太老，由於菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。
革蘭氏染色步驟是什麼？
6樓：帳號已登出
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：
1、塗片固定。
2、草酸銨結晶紫染1分鐘。
3、蒸餾水沖洗。
4、加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。
5、水洗，用吸水紙吸去水分。
6、加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。
7、蕃紅染色液（稀）染1分鐘後，蒸餾水沖洗。乾燥，鏡檢。
原理
通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙；
因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
以上內容參考：百科-革蘭氏染色。
革蘭氏染色為什麼脫色後從黑色變成藍色
7樓：
摘要。革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；革蘭氏陰性菌的細胞壁類脂含量低，乙醇在脫色時反而使細胞壁脫水而使肽聚層孔徑縮小，降低了細胞壁的通透性，從而使細菌保留了初染的顏色，藍紫色。
革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失悶拍敬水反而使網孔縮小，再加賀橘上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙螞慎，因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；革蘭氏陰性菌的細胞壁類脂含量低，乙醇在脫色時反而使細胞壁脫水而使肽聚層孔徑縮小，降低了細胞壁的通透性，從而使細菌保留了初染的顏色，藍紫色。
革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能搜基阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙世知謹黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色；革蘭氏陰性菌的細胞壁類脂含量高，乙醇在脫色時溶猛陵解了類脂質，增加了細胞壁的通透性，從而複合物滲出，再復染時再呈紅色；
革蘭氏染色法是1884年由丹麥醫師gram創立。至今仍是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法。 細菌先經鹼性染料結晶紫染色，而後經碘液進行媒染，之後用酒精脫色。
在一定條件下，有的細菌媒染後的顏色不被脫去，有的可被脫去，因此把細菌分為兩大類。前者叫做革蘭氏陽性菌(g+)後者為革蘭氏陰性菌(g-).為方便進一步觀察，脫色後可再用鹼性染料蕃紅進行復染，陽性菌呈紫色，陰性菌呈紅色正飢。
革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚，肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失餘旁水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，因此能把結晶紫於碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄，外膜層類脂含量高，肽聚糖豎清橡層薄，且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃或蕃紅等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
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