轉殖形成實驗結晶紫染色後怎麼計數

1樓：嚴霖禁止

準備一系列在25cm 2 培養瓶中培養的細胞，6組試劑濃度，每組各3瓶，另有3組作對照。每個培養瓶中接種細胞懸液（細胞密度為每毫公升培養基5×10 4 個細胞），溫育48h，胞將進入對數生長期鍵者。單層細胞轉殖形成實驗。

細胞以胰蛋白酶消化、計數、稀釋後做單層轉殖實驗：和貼瓶率測試。受試物可於耐亮橋胰蛋白酶消化前或轉殖化接種後加入昌猛。

當集落生長到可用肉眼觀察到但並未重疊生長時，將其固定並染色，準備一系列待測物質的稀釋液，每組2ml，為所需終濃度的10倍。若是首次測定的化合物，在3～5個對數生長範圍內採用5倍稀釋。若能**大致的毒性濃度，可以選擇乙個較窄的計算範圍，每組相隔10或20個數量級。

在每組濃度的3個培養瓶中各加入倍濃度的待測化合物，從對照組（不含待測物質，但含有用於毒性測定的溶劑）開始，然後從最低濃度向最高濃度進行。

2樓：隨和又老實灬閨秀

取清潔計數板和專用蓋玻片，用絲綢布輕輕拭簡如干。

取細胞懸液 0."3ml,加入 0."9ml 結晶紫(或臺盼至)染液，混勻後毀巨集滴半滴於血球計數板內，以充滿不外溢為宜。

也可直接將細胞懸液在一側滴加到蓋玻片中，不要攔餘啟溢位，也不要過少或出現氣泡。

在顯微鏡下用 10×物鏡觀察計數四角大分格中的細胞數。代入下式得出細胞密度。

求細胞侵襲實驗用的結晶紫染色方法

3樓：太陽蛙蛙

① 用棉籤擦去基質膠和上室內的細胞。

染色：採用結晶紫染色。

這種方法有如下優勢：(1). 不需要固定細胞，直接染色即可。

2). 配製簡單方便。(3).

染色後可以用33%醋酸脫色，將結晶紫完全洗脫下來，洗脫液可在酶標儀上570nm 測其od值，間接反映細胞數。

結晶紫一染就出來了，我做的時候沒做固定，用的結晶紫濃度較高，搖了5分多鐘的板子，鏡下就直接可以看到染上色的細胞了。

4樓：網友

博凌科為解答：1、甲醇固定5－水洗3次。3、蘇木素染5－10min，水洗3次%乙醇乙醇無水乙醇二甲苯樹膠封片。