1樓:匿名使用者
腺病毒載體的優點
1. 宿主範圍廣, 對人致病性低
腺病毒載體系統可廣泛用於人類及非人類蛋白的表達。腺病毒可感染一系列哺乳動物細胞,因此在大多哺乳動物細胞和組織中均可用來表達重組蛋白。特別需要指出的是:
腺病毒具有嗜上皮細胞性,而人類的大多數的腫瘤就是上皮細胞**的。另外,腺病毒的複製基因和致病基因均已相當清楚,在人群中早已流行(70-80%**體內都有腺病毒的中和抗體存在)。人類感染野生型腺病毒後僅產生輕微的自限性症狀,且病毒唑**有效。
2. 在增殖和非增殖細胞中感染和表達基因
逆轉錄病毒只能感染增殖性細胞,因此dna轉染不能在非增殖細胞中進行,而必須使細胞處於持續培養狀態。腺病毒則能感染幾乎所有的細胞型別,除了一些抗腺病毒感染的淋巴瘤細胞。腺病毒是研究原代非增殖細胞基因表達的最佳系統,它可以使轉化細胞和原代細胞中得到的結果直接進行對比。
3. 能有效進行增殖,滴度高
腺病毒系統可產生1010到1011vp/ml,濃縮後可達1013vp/ml,這一特點使它非常適用於基因**。
4. 與人類基因同源
腺病毒載體系統一般應用人類病毒作為載體,以人類細胞作為宿主,因此為人類蛋白進行準確的翻譯後加工和適當的摺疊提供了一個理想的環境。大多數人類蛋白都可達到高水平表達並且具有完全的功能。
5. 不整合到染色體中,無插入致突變性
逆轉錄病毒可隨機整合到宿主染色體,導致基因失活或啟用癌基因。而腺病毒則除了卵細胞以外幾乎在所有已知細胞中都不整合到染色體中,因此不會干擾其它的宿主基因。在卵細胞中整合單拷貝病毒則是產生具有特定特徵的轉基因動物的一個較好的系統。
6. 能在懸浮培養液中擴增
293細胞可以適應懸浮培養,這一調整可使病毒大量擴增。大量事實證明懸浮293細胞可在1~20l的生物反應器中表達重組蛋白。
7. 能同時表達多個基因
這是第一個可以在同一細胞株或組織中用來設計表達多個基因的表達系統。最簡單的方法是將含有兩個基因的雙表達盒插入腺病毒轉移載體中,或者用不同的重組病毒共轉染目的細胞株來分別表達一個蛋白。測定不同重組病毒的moi比值可正確估計各重組蛋白的相對共表達情況。
正是由於具有以上一些優點,腺病毒被極其廣泛地應用於體外基因轉導、體內接種疫苗、和基因**等各個領域。
利用PCR擴增目的基因,那是和目的基因有關嗎
pcr合成的時候當然不只是需要引物,模板鏈也就是目的基因片段是必須的。因為dna聚合酶合成dna時只能從一段已有的dn 段往上加脫氧核苷酸延伸子鏈,而不能從頭合成,所以需要一段引物。引物就是目的基因在5 段的一小段序列,在於模板鏈結合後,taq酶對其延伸完成複製。所以說模板不僅僅是和目的基因有關,應...
標記基因,插入基因,目的基因都分別說的是什麼
比方說吧,對於一個質粒,你把它轉化到大腸桿菌裡面,如果把這個大腸桿菌放在加有抗生素的培養基裡面就掛了,而如果你在質粒上連一個基因表達出來的東西可以讓大腸桿菌不掛,這個就是標記基因,用來篩選出成功轉入了這個質粒的大腸桿菌。而質粒一般是作為外源基因表達的載體,你要表達某個基因,它就叫目的基因,可以通過p...
酶將質粒載體與目的的基因構建為基因表達載體,有幾
基因表達載體的構建 即目的基因與運載體結合 是實施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩定存在,並且可以遺傳給下一代,同時,使目的基因能夠表達和發揮作用。將目的基因構建在表達載體上的方法有哪些 有兩種常用的方法。第一種是直接將pcr擴增的基因片段酶切,然後連線到...