1樓：匿名使用者
甘油就可以了,dmso是用來保護細胞這種比較嬌嫩的,大腸桿菌就用便宜一點的好了. 有問題一起討論解決哦~
大腸桿菌感受態細胞製備為什麼要加入甘油
2樓：阿魯巴星人
加甘油的大腸桿菌感受態一般是用來電轉的吧，加甘油是為了保護大腸桿菌。
在製備感受態細胞，儲存的時候用的甘油的濃度？以及加完甘油後最終的濃度？
3樓：天涯_海角
配製30%的甘油，儲存的時候等體積加入感受態細胞中，甘油終濃度為15%。
製備出來的感受態細胞在什麼時候做轉化最佳
4樓：阿魯巴星人
當場做出來的，當時做轉化，轉化效率最高。
儲存在-80冰箱的感受態，儲存40天以後，感受態效率會有明顯下降。
在製備感受態細胞，儲存的時候用的甘油的濃度
5樓：匿名使用者
我們通常是配製80%的甘油，然後高壓滅菌備用。用的時候，取一半甘油一半菌液即可，-80儲存，復甦沒有問題。甘油的終濃度是40%。
6樓：天涯_海角
有那麼高嗎，我剛做的，甘油終濃度用的是15%。
7樓：匿名使用者
一般100ml 0.1mcacl2加入4ml甘油
8樓：輝楚達鳥
配製30%的甘油，儲存的時候等體積加入感受態細胞中，甘油終濃度為15%。
製作大腸桿菌感受態細胞時，最後儲存細胞時用甘油好呢？還是用dmso好呢
9樓：匿名使用者
甘油就可以了，dmso是用來保護細胞這種比較嬌嫩的，大腸桿菌就用便宜一點的好了。
希望能夠幫到你~有問題一起討論解決哦~
10樓：匿名使用者
感受態細胞一般都是用甘油就可以了，放在-80冰箱半年內都有效
11樓：匿名使用者
我建議用甘油，但是還要看你個人了
甘油保護下的感受態細胞下次使用時怎麼處理
12樓：百浩生物
感受態解凍了直接使用，不用再處理了。
這個開始製備工藝及儲存條件。
用前不用處理。
感受態細胞的製備時有什麼注意事項
13樓：天寂無痕
1、培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法，它實際是利用了所有有利於感受態的文獻而得出的一
個非常理想方法。
2、在儲存感受態時，dmso 要比甘油的效果要好，它會使感受態的效率增加。
3、液氮速凍也會使感受態的效率提高，因此推薦用液氮速凍感受態，然後儲存於超低溫冰箱內。
4、凍存的感受態用一次拿一管，不要反覆凍融。化凍之後立即使用，不要冰上放太久。
5、操作時可以輕彈輕甩，儘量避免用移液器吹吸。
14樓：y神級第六人
（1）質粒dna的質量和濃度：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
（2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃
（3）細胞的生長狀態和密度
最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
（二）感受態細胞轉化中的影響：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
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