1樓：匿名使用者
首先你的檢樣
必須按標準7.1的要求進行稀釋，即稱取檢樣25g（液體吸取25ml），用225ml滅菌生理鹽水稀釋成為1：10的均勻的稀釋液。
再以1：10為基準液稀釋成1：100、1：
1000……等稀釋液。
國標的mpn表是用1：10液1ml，1：100液1ml和1：
1000液1ml各接種培養三支單料管的情況為基準的，如果你用1：10液10ml接種三支雙料管，1：10液1ml和1：
100液1ml各接種三支單料管，那麼查mpn表即得。
如果你用1：100液1ml、1：1000液1ml和1：10000液1ml各接種三支單料管，那麼查mpn表後將表內資料乘以10即得。
另外，mpn表中的陽性管數是最終證實實驗結果為陽性且革蘭氏染色為陰性無芽孢桿菌的管數，而不是被髮酵時產氣的管數。證實試驗要接的管數=初發酵產氣的管數。
2樓：手機使用者
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大腸桿菌的檢測方法
3樓：就醬挺好
多管發酵法。
多管發酵法是一種檢測水體中大腸桿菌的傳統方法，這種方法是在44.5℃的含有熒光底物的培養基上連續培養24h，而後能產生分解熒光底物——葡萄糖醛酸酶，從而釋放出熒光產物，進而使培養基在紫外光照射下產生特徵熒光。此方法可被用來對原樣品中的菌落數作統計學估計。
在單料或雙料乳糖膽鹽發酵管內發酵，分離培養試驗，利用伊紅美藍培養皿分離，接著是在乳糖發酵管中進行二次發酵，最後通過芽孢染色、革蘭氏染色、顯微鏡觀察等來完成。多管發酵法對試驗條件要求不高，成本低，但是檢測時間較長，容易受其他條件干擾，進而影響到測定結果的精確度。
4樓：點點星光帶晨風
一、細菌的分離鑑定
1、標本：腸道外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等，腹瀉者取糞便。
2、分離培養與鑑定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液需先經肉湯增菌，再轉種血瓊脂平板。其他標本可同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。
37℃孵育18～24小時後，觀察菌落並塗片染色鏡檢。採用一系列生化反應進行鑑定。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要時檢定腸黴毒素。
泌尿系統除確定大腸桿菌外，還應計數，每毫升尿含菌量≥100，000時，才有診斷價值。
二、衛生細菌學檢查
大腸桿菌不斷隨糞便排出體外，汙染周圍環境和水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，表示樣品被糞便汙染越嚴重，也表明樣品中存在腸道致病菌的可能性越大。故應對飲水、食品、飲料進行衛生細菌學檢查。
1、細菌總數：檢測每毫升或每克樣品中所含細菌數，採用傾注培養計算。中國規定的衛生標準是每毫升飲水中細菌總數不得超過100個。
2、大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。中國的衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群；瓶裝汽水、果汁等每100ml大腸菌群不得超過5個。
三、全自動微生物定量分析儀（tempo）檢測
全自動微生物定量分析（tempo）儀的大腸桿菌群計數檢測有tc和cc兩種方法。tempo tc的開發是為了獲得nf iso4832標準相當效能水平。
tempo cc法是tempo儀器上根據bam方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群的方法。該法是為了獲得和aoac官方方法966.24及美國公共健康聯合會檢測乳製品檢測方發（**edp）一致的效果。
tempo系統根據陽性空的大小和數目來推算出原始樣本中大腸桿菌群數目。
5樓：匿名使用者
大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便汙染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否汙染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(mpn)表示。
1 裝置和材料
1.1 溫箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恆溫水浴 :44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 顯微鏡。
1.6 均質器或乳缽。
1.7 平皿:直徑為90mm。
1.8 試管。
1.9 吸管。
1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500ml。
1.11 玻璃珠:直徑約5mm。
1.12 載玻片。
1.13 酒精燈。
1.14 試管架。
2 培養基和試劑
2.1 乳糖膽鹽發酵管:按gb 4789.28中4.9規定。
2.2 伊紅美藍瓊脂平板:按gb 4789.28中4.25規定。
2.3 乳糖發酵管:按gb 4789.28中4.10規定。
2.4 ec 肉湯:按gb 4789.28中4.11規定。
2.5 磷酸鹽緩衝稀釋液:按gb 4789.28中3.22規定。
2.6 生理鹽水。
2.7 革蘭氏染色液:按gb 4789.28中2.2規定。
3 操作步驟
3.1 檢樣稀釋
3.1.1 以無菌操作將檢樣25ml(或g)放於有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:
10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2 用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3 另取1ml滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1ml滅菌吸管。
3.1.4 根據食品衛生標準要求或對檢樣汙染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2 乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖 膽鹽發酵管內,接種量在1ml以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1ml及1ml以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程式進行。
3.3 分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4 證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置 36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5 報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)大腸菌群的mpn值。
4 糞大腸菌群(faecal coliform)
4.1 用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於ec肉湯管內,置44.
5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於ec肉湯液麵),培養24±2h,經培養後,如所有ec肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的ec肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置 培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2 結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)糞大腸菌群的mpn值。
6樓：快樂寶貝加油
水中大腸桿菌檢測，可以用酶底法。工作強度小，準確率高。你可以用這個試劑試試看colitech
7樓：匿名使用者
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便汙染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否汙染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(mpn)表示。
1裝置和材料
1.1溫箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恆溫水浴 :44.
5±0.5℃。 1.
4 天平。 1.5 顯微鏡。
1.6 均質器或乳缽。 1.
7 平皿:直徑為90mm。 1.
8 試管。 1.9 吸管。
1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500ml。
1.11 玻璃珠:直徑約5mm。
1.12 載玻片。 1.
13 酒精燈。 1.14 試管架。
2培養基和試劑
2.1乳糖膽鹽發酵管:按gb 4789.28中4.9規定。
2.2伊紅美藍瓊脂平板:按gb 4789.28中4.25規定。
2.3乳糖發酵管:按gb 4789.28中4.10規定。
2.4 ec肉湯:按gb 4789.28中4.11規定。
2.5磷酸鹽緩衝稀釋液:按gb 4789.28中3.22規定。
2.6生理鹽水。
2.7革蘭氏染色液:按gb 4789.28中2.2規定。
3.1檢樣稀釋
3.1.1 以無菌操作將檢樣25ml(或g)放於有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:
10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2 用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3 另取1ml滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1ml滅菌吸管。
3.1.4 根據食品衛生標準要求或對檢樣汙染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖 膽鹽發酵管內,接種量在1ml以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1ml及1ml以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程式進行。
3.3分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置 36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)大腸菌群的mpn值。
4糞大腸菌群(faecal coliform)
4.1用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於ec肉湯管內,置44.
5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於ec肉湯液麵),培養24±2h,經培養後,如所有ec肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的ec肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置 培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)糞大腸菌群的mpn值。
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