1樓：夢裡浪裡
菌液pcr有風險，因為pcr是有一個級聯放大的效應在裡面，只要在菌液中沾了一點轉化時用的核酸片段，就有可能會擴增出來。但是送去測序的時候，很可能是假陽性，沒有連入任何片段（以前我們就碰到過這種情況，而且還是通過藍白斑篩選的）。如果實在沒有iptg和x-gal，也最好能先挑幾個單菌落去做菌落pcr，從中選取陽性的菌落去做液體搖菌，提質粒，找一個目標判斷上有的酶做一個單切，同時用自連的空載作為對照，看是否能夠切開。
如果菌體克隆切開了，空載切不開，才能說明找到了陽性克隆。送去測序才比較可靠。否則直接送去測序，很可能全是空載，白白耽誤時間。
為了節省時間，也可以先送去測序，等待測序的過程中，進行酶切驗證，對了更好，不對趕緊找其他的菌去送樣。
感受態細菌轉化後在氨苄板上培養12個小時,板上長出菌了，挑菌後搖菌
2樓：愛小腿子
實驗結果不能肯定的說明結果是成功的，做實驗的陰性對照也很重要，陰性對照必須做出陰性結果。如樓下的網友所說，可能是你的感受態菌被質粒汙染了。現在我回答一下你的 追問吧：
「未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出單菌落」，那麼這個長出的單菌落你有沒有做菌落pcr的鑑定？如果你沒有做菌落pcr的鑑定，還有一種可能就是你的板子上的抗生素濃度不夠，導致長出了菌，這個菌到底含不含有你的目的質粒，要做pcr鑑定，不要光看菌落長出與否。建議你把板子的抗生素濃度提高，同時看看未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出的單菌落的pcr鑑定結果，從而判斷是否僅僅是感受態被質粒汙染了
實時pcr產物的tm值為什麼一般是在80以上
pcr的退火溫度是引物與模板之間的，而real time pcr最後的退火溫度是產物之間的。產物的tm值，指的是pcr產物解鏈一半時的溫度。一般realtime pcr 的產物大多在70 200bp之間。當然退火溫度會在80以上了。實時熒光定量pcr，溶解曲線怎麼判斷是否為目的產物 根據曲線初步判斷...
pcr擴增產物的特異性與哪些因素有關
pcr產物的電泳檢測時間 一般為48h以內,有些最好於當日電泳檢測,大於48h後帶型不規則甚致消失.假陰性,不出現擴增條帶 pcr反應的關鍵環節有 模板核酸的製備,引物的質量與特異性,酶的質量及,pcr迴圈條件.尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。pcr非特異性擴增指的是你進行pcr所擴增出來的條...
什麼是初級代謝產物和次級代謝產物
初級代謝的產物，即為初級代謝產物。如單糖或單糖衍生物 核苷酸 維生素 氨基酸 脂肪酸等單體以及由它們組成的各種大分子聚合物，如蛋白質 核酸 多糖 脂質等生命必需物質。通過次級代謝合成的產物稱為次級代謝產物，大多是分子結構比較複雜的化合物。根據其作用，可將其分為抗生素 激素 生物鹼 毒素等型別。所以我...