已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何克隆已知基因

2021-04-21 07:04:09 字數 1934 閱讀 7352

1樓:多1°c熱愛

不知道你bai要克隆什麼基因的du

啟動子?

一般而言zhi,如果是與模dao式生物親緣關版系較近的生物中克隆某

2樓:匿名使用者

看來genome肯定還bai

沒有測序,呵呵

如果有dugenome文庫zhi可以篩文庫,dao如果什麼都沒

有,tail-pcr,i-pcr,接頭專pcr用的最屬常規了,不過有試劑盒賣,你諮詢一下公司!

啟動子有多長,呵呵,這沒有一個人敢確定的說。一般核心啟動子很短,但有些增強子元件可以距離基因很遠,研究一個未知的啟動子可以儘量長一些,但是太長會很不好操作的。所以像ls那位兄弟說的,一般人先取2k左右試試。

祝早日成功!

3樓:黎水之

你指的克隆之前的片段應該是指5'端吧?5'端可以使用專門的試劑盒來克隆,試劑盒裡會有專用的引物,這段專用引物對應的序列是在做5'rt-pcr的時候連線上去的。

急用!一論述題:如何克隆一個功能性基因,如何在原核系統中高效表達? 50

4樓:我和家人

這題目考查的就是基因工程的步驟,詳細敘述下基因工程的步驟即可。

提取目的基因:主要有兩條途徑:如果目的基因序列已知,則用限制性內切酶從供體細胞的dna中直接分離基因;如果序列未知,則人工合成基因。

直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」,用限制酶將供體細胞中的dna切成許多片段,將這些片段分別載入運載體,然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞,讓供體細胞提供的dna(即外源dna)的所有片段分別在各個受體細胞中大量複製(在遺傳學中叫做擴增),從中找出含有目的基因的細胞,再用一定的方法把帶有目的基因的dn**段分離出來;人工合成基因的方法主要有兩條:一條途徑是以目的基因轉錄成的信使rna為模版,反轉錄成互補的單鏈dna,然後在酶的作用下合成雙鏈dna,從而獲得所需要的基因。另一條途徑是根據已知的蛋白質的氨基酸序列,推測出相應的信使rna序列,然後按照鹼基互補配對的原則,推測出它的基因的核苷酸序列,再通過化學方法,以單鏈核苷酸為原料合成目的基因。

目的基因與運載體結合:這是基因工程的核心,三種最常用的載體是細菌質粒、噬菌體和動植物病毒。如果以質粒作為運載體,首先要用一定的限制酶切割質粒,使質粒出現一個缺口,露出黏性末端。

然後用同一種限制酶切斷目的基因,使其產生相同的黏性末端。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處,首先鹼基互補配對結合,兩個黏性末端吻合在一起,鹼基之間形成氫鍵,再加入適量dna連線酶,催化兩條dna鏈之間形成磷酸二酯鍵,從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來,形成一個重組dna分子。

將目的基因匯入受體細胞:基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌,枯草桿菌,土壤農桿菌,酵母菌和動植物細胞等。題目為原核系統,如受體細胞是細菌,一般是將細菌用氯化鈣處理,以增大細菌細胞壁的通透性,使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。

目的基因匯入受體細胞後,就可以隨著受體細胞的繁殖而複製,由於細菌的繁殖速度非常快,在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。

目的基因的檢測和表達:目的基因匯入受體細胞後,是否可以穩定維持和表達其遺傳特性,只有通過檢測與鑑定才能知道。檢測的方法有很多種,例如,大腸桿菌的某種質粒具有青黴素抗性基因,當這種質粒與外源dna組合在一起形成重組質粒,並被轉入受體細胞後,就可以根據受體細胞是否具有青黴素抗性來判斷受體細胞是否獲得了目的基因。

重組dna分子進入受體細胞後,受體細胞必須表現出特定的性狀,才能說明目的基因完成了表達過程。

5樓:匿名使用者

脅下心功1大心心情心兩個義務幣種兩

已知部分基因序列,如何獲得全長基因? 10

6樓:小木魚柔柔

如果是單鏈。可根據鹼基互補配對原則

如果知道其編碼的氨基酸序列,找到密碼子,再根據rna逆轉錄得,只是這樣不唯一

不過我在懷疑,這是不是一道高中題

好像條件不足

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