1樓：砿鄿
雙向瓊脂擴散試驗是在含有電解質的半固體瓊脂板上，將可溶性抗原和抗體分別加入具有一定距離和孔徑的小孔內，使其在一定條件下相互擴散，兩者在比例合適處相遇，形成白色沉澱線(帶)。當存在多種抗原抗體系統時可出現多條沉澱線，然後可根據沉澱線的數目、位置、形狀對抗原抗體系統進行分析。單向瓊脂擴散又稱單向環狀免疫擴散，是一種定量測定抗原的方法。
常用來檢測標本中各種免疫球蛋白及血清中各種補體成分的含量。靈敏度高，可對免疫性疾病作輔助診斷。
瓊脂擴散試驗的注意事項
2樓：一隻筆
不合宜人群：無特殊要求。 檢查時的禁忌：
禁忌暴飲暴食，和劇烈運動，適宜在早晨空腹檢測。 檢查時要求：試驗前應做預試驗，確定抗體的稀釋度。
加樣時不要將瓊脂劃破，以免影響沉澱線的形成。加樣時不同濃度抗體和抗原不要混淆，影響試驗結果。
請教做瓊脂擴散實驗的方法？
3樓：匿名使用者
瓊脂擴散試驗（gel diffusion test）
可溶性抗原與相應抗體在半固體瓊脂凝膠內擴散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉澱。基本型別有單向擴散和雙向擴散兩種。
（一）雙向瓊脂擴散試驗（double immunodiffusion test）
抗原和抗體加到瓊脂板上相對應的孔中，兩者各自向四周擴散，如兩者相對應，濃度比例合適，則經一定時間後，在抗原、抗體孔之間出現清晰緻密的白色沉澱線。每一抗原與其相對應抗體只能形成一條沉澱線，若同時含有若干對抗原抗體系統，因其擴散速度的不同，可在瓊脂中出現多條沉澱線。且根據沉澱線融合情況，還可鑑定兩種抗原是完全相同還是部分相同。
所以，可用此法來分析和鑑定標本中多種抗原或抗體成份，並用以測定抗原或抗體的效價。
【材料】羊抗人全血清，小牛血清，正常人混合血清，精製瓊脂粉，生理鹽水、載玻片，打孔器（直徑3mm）、溼盒、吸管等。
【方法】
1、用生理鹽水配製1.0～1.5%瓊脂，隔水煮沸使溶化，用吸管吸取3.5ml趁熱澆於載玻片上，製成瓊脂板。
2、待瓊脂凝固後，按右圖用打 孔器打孔，並用針頭挑去孔中瓊脂 （孔距為5mm）。
3、在①孔中加正常人混合血清，在②孔中加小牛血清，③孔中加羊抗人全血清，注意不要溢位。
4、將加好樣品的瓊脂板置於溼盒內，於37℃溫箱內放置24小時後觀察結果。
【結果】
觀察孔間沉澱線的數目與特徵，一般可注意到以下幾種現象：
1、抗原與抗體孔間形成一條沉澱線，說明只有一種抗原與相對應的抗體特異性結合，如出現數條沉澱線，說明有幾組不同的抗原和相對應抗體相結合。
2、根據抗原的成份可有以下三種現象：（1）若二孔中的抗原相同，與相應抗體形成的沉澱線融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，當抗血清中分別含有與抗原相應的抗體時，則形成的沉澱線相交叉；（3）若兩孔中抗原部分相同，抗血清中有各相應的抗體，形成的沉澱線相切。
3、相應抗原抗體所形成的沉澱線，如二者濃度相當，沉澱線在孔**，二者濃度不當時，則沉澱線偏向濃度低的一側
（二）單向瓊脂擴散試驗（single immunodiffusion test）—人血清中igg、iga、igm的測定。
單向瓊脂擴散試驗是一種定量試驗，將抗體混合於瓊脂內，傾注於玻片或平皿上，凝固後在瓊脂上打孔，再將抗原標本加入孔內，經過一定的時間，在孔的周圍出現抗原抗體複合物形成的沉澱環，環的大小與抗原含量和擴散時間相關。用不同濃度的抗原製成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從準標曲線中求出。本試驗主要用於檢查血清中各種免疫球蛋白和補體成份的含量。
材料】igg、iga、igm免疫板、參考血清、待檢血清、微量加樣器（10微升）、量尺、紗布、生理鹽水、帶蓋方盤。
【方法】
1、免疫瓊脂板製備：將1.5%瓊脂（用ph8.
2、0.05m的巴比妥緩衝液配成），加熱溶化，待瓊脂冷至56℃加入適量抗血清（抗血清最終稀釋度取決於抗血清所標化的稀釋度），混勻，製成厚1.5mm的瓊脂板，待瓊脂凝固後打孔，孔徑為3mm，孔距1～1.
2cm。
2、稀釋參考血清及待檢血清：參考血清用0.5ml蒸餾水溶解後使用，參考血清、待檢血清稀釋按要求進行。
3、加樣：將上述稀釋參考血清分別滴入相應的抗體免疫板的一排孔內，其餘孔滴加待檢的稀釋血清，每個檢樣加兩個孔，每孔滴加10微升。
4、擴散：將免疫板置水平溼盤內，放進37℃溫箱，igg免疫板擴散24小時，iga、igm板48小時後取出置黑色背景前觀察結果，（如果沉澱環不清晰，也可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小時後觀察），必要時可以染色後觀察。
5、繪製標準曲線及血清標本中igg、iga、igm定量測定：測量沉澱環直徑。沉澱環直徑的大小除與抗原量相關，還與分子量和擴散時間有關。
這種沉澱環直徑與抗原含量的關係不是直線相關，而是對數關係，這種關係有兩種計算方法：
（1）mancini曲線－適用於大分子抗原和長時間擴散（＞48小時）的結果處理。使用方格計算紙劃線，沉澱環直徑的平方與抗原濃度呈線性關係。公式表示：
c／d2 ＝k（c＝抗原濃度，d＝沉澱環直徑，k＝常數）。
（2）fehey曲線－適用於小分子抗原和較短時間（24小時）擴散的結果處理。使用半對數紙劃線，濃度的對數與沉澱環之間呈線性關係。公式表示：
logc／d＝k（c＝抗原濃度，d＝沉澱環直徑，k＝常數）。
【結果】免疫球蛋白的含量用mg/ml表示，不同批號的參考血清其免疫球蛋白含量不一。
請教做瓊脂擴散實驗的方法
4樓：匿名使用者
瓊脂擴散試驗（gel diffusion test） 可溶性抗原與相應抗體在半固體瓊脂凝膠內擴散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉澱。基本型別有單向擴散和雙向擴散兩種。 （一）雙向瓊脂擴散試驗（double immunodiffusion test） 抗原和抗體加到瓊脂板上
瓊脂擴散試驗的介紹
5樓：奔放神
瓊脂擴散試驗為可溶性抗原與相應抗體在含有電解質的半固體凝膠(瓊脂或瓊脂糖)中進行的一種沉澱試驗。瓊脂在實驗中只起網架作用，含水量為99%，可溶性抗原與抗體在其間可以自由擴散，若抗原與抗體相對應，比例合適，在相遇處可形成白色沉澱線，是為陽性反應。沉澱線在凝膠中可長時間保持固定位置並可經染色後乾燥儲存。
沉澱線(帶)對抗原與抗體具有特異的不可透性，而非特異者則否。所以一個沉澱線(帶)即代表一種抗原與抗體的沉澱物，因而本試驗可對溶液中不同抗原抗體系統進行分析研究。
瓊脂凝膠免疫擴散（agid）試驗具體怎樣操作和判定結果？
6樓：中國農業出版社
瓊脂擴散試驗具體操作和結果判定程式如下：
（1）材料準備
①硫柳汞溶液、ph7.2的0.01摩爾/升pbs液。
②製作瓊脂板。
③禽流感瓊脂凝膠免疫擴散抗原、標準陰性和陽性血清。
（2）操作方法
①打孔。在製備的瓊脂板上按7孔一組的梅花形打孔（中間1孔，周圍6孔），孔徑約5毫米，孔距2～5毫米，將孔中的瓊脂用8號針頭斜面向上從右側邊緣插入，輕輕向左側方向將瓊脂挑出，勿傷邊緣或使瓊脂層脫離皿底。
②封底。用酒精燈輕烤平皿底部至瓊脂剛剛要熔化為止，封閉孔的底部，以防側漏。
③加樣。用微量移液器或帶有6～7號針頭的0.25毫升注射器，吸取抗原懸液滴入中間孔（下頁圖中的⑦號），標準陽性血清分別加入外周的①和④孔中，被檢血清按編號順序分別加入另外4個外周孔（下頁圖中的②、③、⑤、⑥號孔）。
每孔均以加滿不溢位為度，每加一個樣品應換一個滴頭。
④作用。加樣完畢後，靜置5～10分鐘，然後將平皿輕輕倒置放入溼盒內，37℃溫箱中作用，分別在24小時、48小時和72小時觀察並記錄結果。
（3）結果判定
①判定方法。將瓊脂板置日光燈或側強光下觀察，若標準陽性血清（圖中的①和④號孔）與抗原孔之間出現一條清晰的白色沉澱線，則試驗成立。
②判定標準a.若被檢血清孔（如圖中的②號）與中心抗原孔之間出現清晰緻密的沉澱線，且該線與抗原和標準陽性血清之間沉澱線的末端相吻合，則被檢血清判為陽性。
b.被檢血清孔（如圖中的③號）與中心孔之間雖不出現沉澱線，但標準陽性血清孔（如圖中的④號）的沉澱線一端向被檢血清孔內側彎曲，則此孔的被檢樣品判為弱陽性（凡弱陽性者應重複試驗，仍為弱陽性者，判為陽性）。
c.若被檢血清孔（如圖中的⑤號）與中心孔之間不出現沉澱線，且標準陽性血清沉澱線直向被檢血清孔，則被檢血清判為陰性。
d.被檢血清孔（如圖中的⑥號）與中心抗原孔之間沉澱線粗而混濁或標準陽性血清與抗原孔之間的沉澱線交叉並直伸，被檢血清孔為非特異反應，應重做，若仍出現非特異反應則判為陰性。
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